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DNA实验

PI(PropidiumIodide 碘化丙啶)染色

2021-07-28 DNA实验 加入收藏
原理荧光显微镜观察1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 106 个/ml;2.取 100 μl 细胞悬液,加入 2-10 μl PI 染液,轻轻混匀;3.4℃ 避光放置 5 min 后,滴加于载玻片上,加盖玻片;4.荧光显微镜检测。流式检测:1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬

原理

荧光显微镜观察

1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 10个/ml;

2.取 100 μl 细胞悬液,加入 2-10 μl PI 染液,轻轻混匀;

3.4℃ 避光放置 5 min 后,滴加于载玻片上,加盖玻片;

4.荧光显微镜检测。


流式检测:

1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 10个/ml;

2.500 μl 细胞悬液中加入 5 μl PI 染液;

3.4℃ 避光放置 30 min;

4.流式细胞仪检测。

材料与仪器

【器材】一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,离心机

【试剂】PI 染色液

【材料】细胞

步骤

荧光显微镜观察

1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 10个/ml;

2.取 100 μl 细胞悬液,加入 2-10 μl PI 染液,轻轻混匀;

3.4℃ 避光放置 5 min 后,滴加于载玻片上,加盖玻片;

4.荧光显微镜检测。


流式检测:

1.收集细胞,PBS 洗涤细胞一次,2000 rpm 离心 5 分钟,用 PBS 重悬细胞,调整细胞浓度约为 10个/ml;

2.500 μl 细胞悬液中加入 5 μl PI 染液;

3.4℃ 避光放置 30 min;

4.流式细胞仪检测。

注意事项

●本染色液用于细胞染色分析,也可用于石蜡切片、冰冻切片、细胞涂片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例,细胞染色可用预冷的 70% 的乙醇固定,4℃,1-2 小时,也可不固定,其他方法请参阅相关资料。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

●染色后请尽快检测。

●染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。

● PI有毒,操作时要戴上手套。

● 流式检测细胞凋亡时,其 DNA 可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一,但这种 DNA 可染性降低也可能是因为 DNA 含量的降低,或者是因为 DNA 结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。


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