运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：

（1）干冰运输，收到后 立即转入液氮或者-80 度冰箱冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生 长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。 收到细胞后请拍照，3 天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。 

 

细胞用途：仅供科研使用。 

 

细胞接收后的处理：

1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细 胞有污染，请拍照后及时联系我们。 

2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4 或 5X 物镜)下进行，能 准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在 10X 和 20×物镜下，同时给刚收 到的细胞拍照，（10×，20×）各 2-3 张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细 胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落 或者脱落后抱团生长，可将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h，然后抽出瓶中 的培养基和未贴壁细胞 1000rpm 离心 5 分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照 说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。

5） 悬浮细胞：T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h，然后抽出瓶中的培养基和 细胞 1000rpm 离心 5 分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说 明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。                         

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备 1640+10%FBS

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱 湿度为 70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检 查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。 

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部 分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止 消化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者 瓶中。 注：第一次传代推荐传代比例为 1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决 定。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面 T25 瓶为例；       

1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗瓶底 1-2 次后加入 1ml 胰酶，细 胞变圆脱落后，加入 2ml 完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。       

2．1000RPM 离心 5 分钟去掉上清。用血清重悬浮，加 DMSO 至最终浓度为 10%。加入 DMSO 后迅速混匀，按每 1ml 的数量分配到冻存管中，注意冻存 管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于 1X106个细胞冻存。

3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，至少 2 个小时以后转入液 氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 

 

 

注意事项：  1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立 即与我们联系。 2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注 意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。