1、细胞名称： PC-12 大鼠嗜铬细胞瘤细胞（未分化）

2、生长特性： 贴壁 

3、细胞生长条件：

培养条件 F-12K+15%HS+5%FBS+1%P/S

温度 37℃

空气条件 5% CO2,95% AIR

传代方法 建议 1:2 传代，2~3 天换液

冻存条件 90%FBS+10%DMSO

4、背景资料：该细胞系来自能移植的雄性大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤。这些细胞表 达神经生长因子(NGF)受体。NGF 可诱导产生神经表型。细胞不合成肾上腺素。

二．使用方法

1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出 25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2 细胞培养箱中静置 3-4 小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养

或进行传代。

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后 将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀细胞用 12ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传 代，最后放入 37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 25cm2培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将 悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h 后转 入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

4、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃ 水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的 15ml 离心管中， 1000rpm 离心 5min；

3）弃上清，沉淀用 5ml 完全培养基重悬，接种 25cm2培养瓶，于 37℃， 5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。