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微生物学

人高转移潜能肝癌细胞MHCC-97H

2024-11-15 微生物学加入收藏

人高转移潜能肝癌细胞MHCC-97H细胞介绍来源于中山医院，用人肝癌细胞株MHCC97-H 接种裸鼠，进行3 次肺转移筛选，取肺转移瘤建成皮下接种后高度自

人高转移潜能肝癌细胞MHCC-97H

细胞介绍

来源于中山医院，用人肝癌细胞株MHCC97-H 接种裸鼠，进行3 次肺转移筛选，取肺转移瘤建成皮下接种后高度自发性肺转移的肝癌细胞系

细胞特性

12） 1）来源：肝癌

2）形态：上皮细胞样

3）含量：＞ 1 x106 个／ml

4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

S）规格： T25 瓶或者 1ml 冻存管包装

运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏：（2）存活细

胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

细胞用途：仅供科研使用。细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备 DM EM 培养基｛DM EM / F-1 2, GIBCO，货号12400024 ，添加NaHC0 3 2.0g/L),

85%：马血清， 10 %；胎牛血清， 5%。

2）培养条件：气相：空气， 95%；二氧化碳， 5%。温度： 37 摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液： 90%完全培养基， 10 %DM SO，现用现配。液氮储存。

二．细胞处理：

1 复苏细胞：将含有1ml 细胞悬液的冻存管在37 °C 水浴中迅速摇晃解冻，加入 4ml 培养基混合均匀。在1000 RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加 1-2ml 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约8ml 培养基，培养过夜〉。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镇离子的PBS 润洗细胞1-2 次。

2. 加 2m l 消化液（0.25%Trypsin-0. 53m M EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按 6-8m l/ 瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加1-2ml 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1: 2 到 1: 5 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞， 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加1-2ml 培养液后吹匀，将细胞悬液按1: 2 到 1: 5 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1: 2 到 1: 3 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量膜酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml 含血清的培养基后加入冻存管中，再添加 10%DMSO 后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集， 1000RPM 条件下离心 4 分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走，〉加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO 后进行冻存。