小鼠骨髓瘤细胞（NS-1）
小鼠骨髓瘤细胞；NS-1
细胞介绍
这是 P3X63Ag8(ATCCTIB-9)的一个不分泌克隆。Kappa 链合成了但不分泌。能
抗 0.1mM8-氮杂鸟嘌呤但不能在 HAT 培养基中生长。据报道它是由于缺失了 3-
酮类固醇还原酶活性的胆固醇营养缺陷型。检测表明肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴
性。
细胞特性
1） 来源：小鼠骨髓瘤
2） 形态：淋巴母细胞
3） 含量：>1x106
4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5） 规格：T25 瓶或者 1mL 冻存管包装
运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后
立即转入液氮或者-80 度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生
长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
收到细胞后请拍照，3 天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。
细胞用途：仅供科研使用。
细胞接收后的处理：
1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细
胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4 或 5X 物镜)下进行，能
准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在 10X 和 20×物镜下，同时给刚收
到的细胞拍照，（10×，20×）各 2-3 张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细
胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。
3）观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h。
4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落
或者脱落后抱团生长，可将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h，然后抽出瓶中
的培养基和未贴壁细胞 1000rpm 离心 5 分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照
说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。
5） 悬浮细胞：T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h，然后抽出瓶中的培养基和
细胞 1000rpm 离心 5 分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说
明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。
6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说
明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建
议 1：2 传代 。
细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备 DMEM(高糖）+10%FBS；双抗，1%。
2）注意：圆形贴壁，传代时不可吹打，使其自然脱落。
3）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱湿度为 70%-80%。
4）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二．细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加
入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补
加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将
细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检
查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培
养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部
分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止
消化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分
钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者
瓶中。
注：第一次传代推荐传代比例为 1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决
定。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面 T25 瓶为类；
1，细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆
脱落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2，4min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加
入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于 1x106/ml，每
支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。
3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，至少 2 个小时以后转入
液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项：
1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立
即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注
意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
