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微生物学

细菌抗酸染色法

2024-05-13 微生物学 加入收藏
原理结核分枝杆菌对苯胺染料一般不易着色,若加温或延长染色时间使其着色后,再用3%盐酸酒精处理也不易脱色,经此染色后,结核分枝杆菌及其他分枝杆菌呈红色,而非抗酸菌

原理

结核分枝杆菌对苯胺染料一般不易着色,若加温或延长染色时间使其着色后,再用3%盐酸酒精处理也不易脱色,经此染色后,结核分枝杆菌及其他分枝杆菌呈红色,而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色。

材料与仪器

结核病人痰
抗酸染色液 盐酸酒精 吕氏美蓝染液
显微镜 玻片 接种环

步骤

1、取洁净的竹签沾取痰中血丝或脓性痰,在清洁无油脂玻片上涂开。涂抹区约拇指盖大。用过的竹签放到空平皿内待高压灭菌。


2、涂片自然干燥后,用片夹挟住玻片一端,通过火焰固定。


3、涂抹面用滤纸片盖上,然后往滤纸片上滴加石炭酸复红染液,使滤纸片完全被染液浸湿,持玻片在小火上加温片刻然后离开火焰,此时可见到玻片上冒出蒸气。待蒸气消失后再加温,如此反复3~4次,约5min,加温时随时添加染液勿使纸片干涸。


4、玻片冷却后,用接种环挑去滤纸扔到污物盆内,流水冲洗玻片。


5、滴加3%盐酸酒精脱色,至涂抹均匀部位基本没有红色再脱下为止,水洗。


6、滴加吕氏美蓝染液30sec,水洗。


7、吸干、镜检。


4、溶液配制


萋-尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液


(1)石炭酸复红液:硷性复红4g,溶于95%酒精100ml,作成饱和溶液,再取该饱和液10ml与5%石炭酸溶液90ml混匀即成。


(2)3%盐酸酒精液。


浓盐酸3ml加入95%酒精97ml中即成。


(3)吕(Loeffer)氏美蓝染色液


美蓝2g,溶于95%酒精100ml中,作成饱和液。再取该饱和液30ml与0.01%氢氧化钾水溶液100ml混合均匀即可。

注意事项

1. 生物样品在使用时禁止直接接触,避免感染。


2. 使用完需要灭菌处理并且放置到指定位置统一处理。

常见问题

抗酸染色法acid-fast staining method 1882年由埃利希(F.Ehrlich)首创并经F.齐尔(Ziehl)改进而创造出的细菌染色法。其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森(Ziehl-Neelsen)染色法和齐尔-加贝特(Ziehl-Gabbet)染色法。用石炭酸复红染色后,用盐酸乙醇分色,再用美蓝进行对比染色,即不再脱色而呈现石炭酸复红的红色。


溶液配制


萋-尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液


(1)石炭酸复红液:硷性复红4g,溶于95%酒精100ml,作成饱和溶液,再取该饱和液10ml与5%石炭酸溶液90ml混匀即成。


(2)3%盐酸酒精液。


浓盐酸3ml加入95%酒精97ml中即成。


(3)吕(Loeffer)氏美蓝染色液


美蓝2g,溶于95%酒精100ml中,作成饱和液。再取该饱和液30ml与0.01%氢氧化钾水溶液100ml混合均匀即可。


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