幽门螺杆菌的基因诊断

幽门螺杆菌的基因诊断 　　早在19世纪未，就有注意到胃粘膜组织中存在一种螺旋形微生物，其后陆续有类似的报道，但均未引起人们的足够重视.1983年，澳大利亚学者Wanen和Marshall报告，在人胃粘膜活检组织中分离出这种细菌，即幽门螺杆菌(HelicobacterPYlor;HP;原名幽门变曲菌CampylobacterPylor;CP)，并认为该菌可能是慢性胃炎和消化性溃疡的病原菌.随后各国学者相继进行研究，欧洲九国成立了HP研究协作组，每年召开一次专题讨论会.美国、荷兰、加拿大、日本、等亦都主办过国际性专题讨论会.1990年在澳大利亚召开的第九届世界胃肠病学大会上，一个专题委员会对HP的研究现状进行了总结，基于HP研究后重大进展，产生了新的胃炎分类法--悉尼系统，我国于1985年开展HP的研究， 　　1987年在昆明召开的第三次全国消化系统病学术会议上有多篇HP的研究论文，随后逐渐形成了全国范围的研究高潮.有关HP是人类慢性胃炎的汉病因子，并与消化性溃疡和胃癌有密切关系已为大多数的摘要，抗HP感染治疗方案已成为HP相关疫病温床常用的治疗方案. 一、HP的流行病学与生物学特性. 　　HP是一种微需氧的草纸阴性细菌，在光钳下，约3μm长，0.5μm宽，呈轻度“S”形变曲，与常见的空肠/结肠变曲菌很相似，直接镜检中，有时在菌体周围可见有类似荚膜的不易着色的洗染区，大多数细菌具有位于细菌一端的鞭毛，长约3--5μm，2--6根不等.人的胃粘膜菌是HP的自然定植部位，在Barretl食管，Meekel憩定和直肠的胃粘膜化生区也检出HP，但在肠粘膜上皮未见HP定植.HP主要位于胃的粘液层，与上皮细胞紧密接触.通过钙红染色呈示，在细菌和上皮细胞之间有纤丝样结相连.有时，HP集中在细胞连接处的周围，乃致破坏细胞连接而强行深入细胞间隙，从而摄取更多的从组织中漏出的营养，如尿素等，HP的生化特征是具有高活性的尿素酶，分解尿素产生氨，这在环境中起了中和作用.HP还能通过一些特异性的解体因子，形成粘着样结构，而牢牢粘附在组织表面的某些细胞上，在退变的上皮细胞表面往往可观察到HP. 　　HP感染在世界各地都较为常见，但发展中国家经济，饮食已在较差的地区的感染率显得更高，尤其是儿童的染感率发达国家和发展中国家有较大的区别.据估算，全球大约有近50%的人口胃内有HP的定居，流行病学调整表明，HP的流行状况与慢性胃炎，胃十二指肠溃疡及胃癌有密切的评价关系，初次感染年龄较早的人群，胃癌的发病率也较高，人们已接受HP是慢性胃炎的主要病因.胃炎的发率与HP的感染率均随年龄的增长而增高，一见感染HP，多持续终生.在不同地区，不同种族，不同人群或同一人群的不同个体之间，HP的感染率差别很大，这与已生习惯和设备有关. 　　该菌的传播主要是人--人之间通过口--口途径.已有报道在家庭内通过密切接触可造成传播.另外，内镜检查也可传播HP.具有活力的螺旋形HP在河水中至少可存活一周，而球形的HP则可存活一年多，但后者无致病力. 二、HP的实验室诊断. 一)组织学检查方法: 　　组织学检查主要依靠涂片或切片，在染色的基础上用光镜或荧光显微镜等进行肉眼观察，依据染色的形态进行结果判定，此方法的特是，直接廉价可判成标本细菌长期保存，有一定的灵活度，但在细菌量较少，治疗后情况下，易产生阴性结果，遇到在地形态相似的细菌及颗粒时，有可能被误诊为HP，有时，在外科切除的标本中，也有可能及颗粒因固定不好，细菌分解或形态不典型而难以，而造成假阴性结果.

二)尿素酶法: 　　HP能定居在PH值很低的人胃粘膜的粘层之下，上皮细胞表面，迄今，该部位未见本地的细菌)，就应因为它能分泌大量的活性很高的尿素酶，尿素酶对PH具有自身保护作用，它水解尿素，生成氨和二氧化碳，氨在HP菌体周围形成一层保护性“氨气”，对于抵御胃纹的杀菌作用具有重要的意义.因为，人体内能产生尿素酶的细菌很少，体内HP的感染活性也不太高，因此，检测尿素酶能基本上反应体内HP的感染状况，尤其是它简单、快速、兼价、易于推广、所以易为临床检验人员接复，但由于尿素酶活性的检测主要都是观察它对尿素的降解，产生氨，周围环境PH值升高作为依据的，因此，在HP数量较少时，易出现假阴性，并且会由于其他种类的细菌数量相对比例增大，有时也会出现假阳性，尤其是在治疗一段时间后，多种药物都会影响尿素酶的活性，造成假性结果. 三、免疫学方法 　　目前应用的主要免疫学方法为:免疫印迹技术和酶联免疫叭附试验(ELISA).这两种方法具有较高的特异性和敏感性，尤其是血清时可以作为操作标本，因而为非侵入性检测手段，易为病人接受，可进行大量标本的筛选实验，但由于HP寄生在胃粘膜外，对未几体的致解能力相对较弱，在早期感染细菌数较少的情况下，会出现一部分假阴性，非特异的主要反应会导致部分假阳性. 四、培养: 　　细菌培养结合生化鉴定也可以说是检测HP的“金标准”.但培养的成功与否取决于标本取材的部位、数量、时间等.HP的培养条件相对也较为复杂，培养周期亦较长，故细菌培养，较难作为常规性的检测手段. 五、基因诊断: 　　HP的基因诊断主要包括探针杂交法和PCR法.1992年前，由于对HP的基因结构了解不多，特异性区域较少，因而主要用标记的致探针杂交法来研究及检测HP.杂交法前几种方法更为敏感和特异，特别是对于细菌量较少的或在形态上难以确定的标本，杂交法显示出明显的优势.但杂交法操作较为复杂，难以对大批量标本进行研究.从1990年起陆续有人用PCR来检测HP，通过近几年的大量实践，PCR法在用于HP的研究A-检测中，显示出无比的优越性，它以快速、特异、敏感、直接，易于自动性，易于普及，检测范围广泛突出优点，成为研究与检测HP基因结构、变异，与相关疾病关系，等方法的权威性方法，并越来越复制全球的广范关注. >