双向电泳溶液配制大全

A. 裂解液 (lysis solution) (8M Urea, 4%CHAPS, 2% Pharmalyte3-10, 40 ml)

Final concentrationAmountUrea(Fw 60.06)8M19.2gCHAPS4%(w/v)1.6gPharmalyte3-102%800μlDouble distilled H2OTo 40ml

新鲜配制或者分装贮存于-20℃ ① 如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M，也可用 7M Urea，2M Thoiurea。 ②其他的去垢剂(如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂或者双性离子去垢剂)可以取代 CHAPS。 ③如果需要，蛋白质酶的抑制剂和或者还原剂可以加入。

B.水化液 (不含有 IPG buffer, Rehydration stock solution without IPG buffer) (8M Urea, 2% CHAPS, bromophenol blue,25ml)

Final concentrationAmountUrea (FW 60.06)12g12gCHAPS2%(w/v)0.5gBromophenol blue0.002%(w/v)50μlDouble distilled H2OTo 25ml

分装贮存于-20℃ ①DTT和 IPG buffer在用之前加入：每 2.5ml 水化液加 7mg DTT。如果胶内上样，则样品液在用之前加入到 2.5ml的水化液中。 ②如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M。 ③其他的去垢剂(如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂23或者双性离子去垢剂)可以取代 CHAPS。

Final concentrationAmount溴酚蓝储液Bromophenol blue1%100mgTris-base50mM60mgDouble distilled H2OTo 10ml

C. 水化液 (含有 IPG buffer，Rehydration stock solution with IPG buffer) (8M Urea，2% CHAPS，0.5% or 2% IPG buffer，bromophenol blue，25ml)

Final concentrationAmountUrea (FW 60.06)8M12gCHAPS2%(w/v)0.5gIPG buffer(same pH range as the IPG strip)0.5%or 2%(v/v)125 or 500μltd>Bromophenol blue0.002%(w/v)50μl 1% solutionDouble distilled H2OTo 25ml

分装贮存于-20℃ ①DTT和 IPG buffer在用之前加入：每 2.5ml 水化液加 7mg DTT。如果胶内上样，则样品液在用之前加入到 2.5ml的水化液中。 ②IPG buffer 的浓度取决于所用的等电聚焦系统和 IPG胶条的 pH 范围。 ③如果需要，尿素的浓度可以调高到 9或者 9.8M。 ④其他的去垢剂(如 Triton X-100，NP-40，还有其它的非离子去垢剂或者双性离子去垢剂)可以取代 CHAPS。 ⑤浓度为 0.5%的 IPG buffer用 125μl IPG buffer，浓度为 2%则用 500μl。

D.平衡液(SDS equlibration buffer)(50mM Tris-cl pH8.8, 6M Urea, 30% glycerol, 2% SDS, bromophenol blue, 200ml)

Final concentrationAmount1.5M Tris-cl,pH8.8(see solution F)50mM50mM 6.7mlUrea(Fw 60.06)6M72.07gGlycerol(87% v/v)30%(v/v)69mlSDS(Fw 288.38)2%(w/v)4.0gBromophenol blue0.002%(w/v)400μl 1% solutionDouble distilled H2OTo 200ml

分装 40ml 贮存于-20℃。这是一个贮存液。用之前在加 DTT或者碘乙酰胺。

E.单体贮存液(Monomer stock solution) (30% acrylamide,0.8% N,N!-methylenebisacrylamide,200ml)

Final concentrationAmountAcrylamide(Fw 71.08)30%60.0gN,N`-methylenebisacrylamide(Fw 154.17)0.8%1.6gDouble distilled H2OTo 200ml

用 0.45微米的滤纸过滤。4℃避光保存。

F.4x分离胶溶液(4x Resolving gel buffer)(1.5M Tris-Cl pH8.8, 1000 ml)

Final concentrationAmountTris-base(Fw 121.1)1.5M181.5gDouble distilled H2O750mlHCl(Fw 36.46)Adjust to pH8.8Double distilled H2OTo 1000ml

用 0.45微米的滤纸过滤，4℃保存。

G.10% SDS溶液

Final concentrationAmountSDS(Fw 288.38)10%(v/v)5.0gDouble distilled H2OTo 50 ml

用 0.45微米的滤纸过滤，室温保存。

H.10%过硫酸铵(10% Ammonium persulphate)

Final concentrationAmountAmmonium persulphate(Fw 228.20)10%0.1gDouble distilled H2OTo 1ml

当加入水时，新鲜的过硫酸铵会发出“咔嚓”声音。如果没有声音，则需要换新的药品。用之前配制。