小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)

小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)介绍：与原始的随机交配3T3 和近交系BALB/c 3T3 建株方法一样，NIH/3T3，是从NIHSwiss 小鼠胚胎培养物中建立的高度接触抑制的连续细胞株。为了培育在形态学特征上更适合于进行转化分析的亚株，建立的NIH/3T3 细胞株又进行了五轮以上亚克隆。小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)对DNA 转化及转染研究十分有用。检测表明肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性。

小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)特性：

1） 来源：胚胎

2） 形态：成纤维细胞

3） 含量：>1x106 个/mL

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25 瓶或者1mL 冻存管包装

运输和保存：使用含有优质胎牛血清的2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min 后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm 培养皿或者T25 培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)用途：仅供科研使用。

小鼠胚胎细胞(NIH/3T3)培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备DMEM 培养基(DMEM，GIBCO，货号11965-092)，北美胎牛血清，15%，1% PS。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37 摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL 细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL 培养基混合均匀。在800-1000RPM 条件下离心4-5 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25 培养瓶中培养，补加培养基至6ml。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS 润洗细胞1-2 次。

2. 加1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2ml 完全培养基终止消化。

3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM 条件下离心5 分钟，弃去上清液，加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2 到1:5 比例分到新的含6ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25 瓶为例；

1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗瓶底1-2 次后加入1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml 完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2．1000RPM 离心5 分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO 至最终浓度为10%。加入DMSO 后迅速混匀，按每1ml 的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物（mingzhoubio）按每个冻存管细胞数目大于1X106 个细胞冻存。

3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，至少2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

注意事项：

1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。