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人原髓细胞白血病细胞(HL-60)

2024-11-24 微生物学加入收藏

人原髓细胞白血病细胞(HL-60)人原髓细胞白血病细胞(HL-60)介绍：人原髓细胞白血病细胞(HL-60) 是一株早幼粒细胞。外周血白细胞来自一位患有急性粒-

人原髓细胞白血病细胞(HL-60)

人原髓细胞白血病细胞(HL-60)介绍：人原髓细胞白血病细胞(HL-60) 是一株早幼粒细胞。外周血白细胞来自一位患有急性粒-单核细胞白血病36 岁白人女性。HL-60 自发分化，丁酸盐、次黄嘌呤、佛波醇肉豆蔻酸(PMA,TPA)、DMSO(1% to 1.5%)、放线菌素D 和视黄酸可以促进分化。细胞表现出吞噬活性，并对趋化刺激有响应。致癌基因myc 表达阳性。

人原髓细胞白血病细胞(HL-60)特性：

1）来源：外周血；早幼粒细胞；急性粒－单核细胞白血病

2）形态：原粒细胞

3）含量：>1x106 个/mL

4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5）规格：T25 瓶或者1mL 冻存管包装

运输和保存：

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：

（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

人原髓细胞白血病细胞(HL-60)用途：仅供科研使用。

人原髓细胞白血病细胞(HL-60)培养步骤

一．人原髓细胞白血病细胞(HL-60)培养基及培养冻存条件准备：

1）准备IMDM 培养基(IMDM,GIBCO,货号12200036)，80%；优质胎牛血清，20%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37 摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL 细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL 培养基混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm 皿中，加入约8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS 润洗细胞1-2 次。

2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2 到1：3 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml 含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO 后进行冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM 条件下离心4 分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO 后进行冻存。