凯氏（ Kjeldahl ）微量定氮法测定血清蛋白质含量

【原理】 凯氏定氮法是蛋白质含量测定的经典方法，它是根据蛋白质分子中含氮量来测定的，各种蛋白质含氮量比较近似，平均约为 16 ％，即 1g 氮相当于 6.25g 蛋白质。由测定出 的氮量即可换算出蛋白质含量。 血清蛋白质或其它有机含氮物与浓硫酸加热进行消化 ( 氧化 ) 时，其中碳、氢、氧元素分别被氧化为二氧化碳和水，而氮原子则转变成氨，后者与硫酸结合生成硫酸铵，留在溶液中，为了加速有机物质的氧化分解，在消化时加入硫酸铜做为催化剂，加入硫酸钾以提高消化液的沸点。硫酸铵与氢氧化钠作用，放出氨，通过水蒸气蒸馏将氨带入接收瓶中被硼酸溶液吸收，使溶液中氢离子浓度降低，指示剂颜色发生改变，用已知浓度的标准盐酸滴定，直至原来溶液中氢离子的浓度恢复，即指示剂变为原来的颜色。根据所消耗的标准盐酸量，即可计算出样品中的总氮量。化学反应式如下： 1 ．消化 含氮化合物 +H 2 SO 4 —→CO 2 ↑+H 2 O +(NH 4 ) 2 SO 4 +SO 2 ↑ 2 ．蒸馏 (NH 4 ) 2 SO 4 + 2NaOH—→2NH 4 OH+Na 2 SO 4 NH 4 OH—→NH 3 ↑+ H 2 O 3NH 3 +H 3 BO 3 —→(NH 4 ) 3 BO 3 3 ．滴定 (NH 4 ) 3 BO 3 +3HCl—→3NH 4 Cl+H 3 BO 3 以上测定为样品中的总氮量，由总氮量减去非蛋白氮，即为蛋白质含氮量，再乘以 6  .  25 即为血清蛋白质含量。 【器材】 1 ．电炉 2 ．铁三角架 3 ．酒精灯 4 ．锥形瓶 5 ．消化管（凯氏烧瓶） 6 ．滴定管 7 ．微量凯氏定氮器 8 ．刻度吸量管 9 ．玻璃珠 10 ．漏斗 11 ．血清 【试剂】 1 ．硫酸钾粉末 2 ． 12  .  5 ％硫酸铜水溶液 3 ．浓硫酸 4 ． 2 ％硼酸水溶液 5 ．混合指示剂 取 0  .  1 ％溴甲酚绿乙醇溶液 10ml 与 0  .  1 ％甲基红乙醇溶液 4ml 混合 6 ． 30 ％氢氧化钠溶液 7 ． 0  .  0lmol  /  L 盐酸标准溶液