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微生物学

人类免疫缺陷病毒标本采集及处理方法

2024-04-17 微生物学 加入收藏
简介艾滋病检测最常用的标本是血液,包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。标本采集和处理参照《全国艾滋病检测技术规范(2009年版)》。原理人类免

简介

艾滋病检测最常用的标本是血液,包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。标本采集和处理参照《全国艾滋病检测技术规范(2009年版)》。

原理

人类免疫缺陷病毒标本采集及处理方法的基本原理是 HIV 感染的诊断是以实验室检查为基础,结合临床表现和参考流行病学资料综合进行。实验室检查需根据检测目的和检测项目不同,采集不同标本种类。

材料与仪器

器材:真空采血管或一次性注射器、采血针、离心机等。

步骤

人类免疫缺陷病毒标本采集及处理方法的基本过程可分为如下几步:

(一)标本采集

A 血液

① 静脉血:消毒局部皮肤,用加有抗凝剂(或未加抗凝剂)的真空采血管抽取适量静脉血,或用一次性注射器抽取静脉血,转移至加有抗凝剂(或未加抗凝剂)的试管中,轻轻颠倒混匀 6~8 次,备用;

②末梢血(通常为指尖血):消毒局部皮肤(成人和 1 岁以上儿童可选择耳垂、中指、无名指或示指。1 岁以下儿童采用足跟部)。用采血针刺破皮肤,用无菌棉签擦掉第一滴血。收集滴出的血液,备用。

B 尿液

使用清洁的容器收集尿液。女性应避开月经期。尿液样品可以在 2~8 ℃ 存放。

C 唾液

使用检测试剂盒提供的容器收集唾液样品。

(二)标本处理

用于核酸定性检测时,采集的抗凝全血应在 4~8 小时内分离 PBMC 和血浆,否则应在 24~48 小时内分离血浆和血细胞。

A 血浆:将采集的抗凝全血 1500~3000 r/min 离心 15 分钟,上层即为血浆,吸出置于合适的容器中,备用。

B 血清:根据需要,用一次性注射器(或真空采血管)抽取 5~10 ml 静脉血,室温下自然放置 1~2 小时,待血液凝固、血块收缩后再用 1500~3000 r/min 离心 15 分钟,吸出血清,置于合适的容器中,备用。

C 淋巴细胞富集液:将采集的抗凝全血 1500~3000 r/min 离心 15 分钟,吸取血浆层下的淋巴细胞富集液,置于合适的容器中,备用。

D PBMC:使用淋巴细胞分离液,进行密度梯度离心,吸出 PBMC 层,备用。

注意事项

1 采样时间:采集抗凝全血用于 CD4+ T 淋巴细胞测定时,由于 CD4+ T 淋巴细胞数存在日间自然变化的个体差异,每一患者采样时间应尽可能集中在某个相同的时段。如:每次采样时间均在上午或均在下午。

2 采集要求:采样前要检查所需物品是否已备齐,是否在有效期内,有无破损,是否足量,特别应检查受检者信息与样品容器表面的标记是否一致,并注明样品采集时间。

抽取静脉血液(或以其他方式收集血液样品)时要注意安全,应使用一次性注射器或一次性真空采血管,采血部位要严格消毒,戴手套,谨慎操作,防止刺伤皮肤和造成外界环境污染。不在现场检测的样品,通常采集 5 ml 静脉血,现场分离血清或血浆后直接送到相关的检测点或筛查实验室。

采血完成后的穿刺针头必须丢弃于尖锐危险品容器里,妥善处理,防止发生职业暴露,遵守生物安全要求。

3 样品的保存:① 用于抗体检测的血清或血浆样品,应存放于 - 20 ℃ 以下,短期(1 周)内进行检测的样品可存放于 2~8 ℃;② 用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于 - 20 ℃ 以下,进行病毒 RNA 检测的样品如需保存 3 个月以上应置于 - 80 ℃;③ 用于 CD4+/CD8+ T 淋巴细胞测定的样品不能长期保存,样品采集时间超过 48 小时则不可检测。

4 标本的包装与运送:实验室间传递的样品应为血清或血浆,除特殊情况外一般不运送全血。标本运送时应采用三层容器进行包装,随样品应附有与样品唯一性编码相对应的送检单。送检单应标明受检者姓名、样品种类等信息,并应放置在第二层和第三层容器之间。样品的运送应符合生物安全要求,要获得相应部门批准并由具有资质的人员专程护送。

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