血凝试验

血凝试验因敏感、特异性强，且操作简便、快速，现在已成为 WHO 全球流感监测的经典试验之一。

血凝试验的基本原理是流感病毒能引起红细胞凝集主要是由于流感病毒表面的血凝素与红细胞表面的受体结合，病毒被吸附到红细胞上而产生的。但这一过程可被某些物质所抑制。如血清中血凝素抗体能够与病毒血凝素分子的抗原位点特异性结合，干扰病毒血凝素与红细胞上受体的结合过程，从而抑制红细胞凝集。因此，用血凝试验可初步测定样品中是否有病毒的存在以及病毒滴度，用血凝抑制试验可鉴定样品中病毒的型和亚型。

器材：

①一次性无菌手套

②培养箱

③注射器

④细菌滤器

试剂：

①材料：待检病毒样品

②红细胞悬液

③PBS

血凝试验的基本过程可分为如下几步：

1. 选择 96 孔板，如使用鸡或火鸡红细胞，应选 V 型微量血凝板；如使用豚鼠或人 O 型红细胞，应选 U 型微量血凝板。将微量板横向放置：垂直方向称列，如孔 A1～H1 称为第一列；平行方向称行，如 A1～A12 称为 A 行。标记好待检病毒的实验室编号及加样顺序。

2. 病毒液倍比稀释

1）加 PBS：取 8 道加样器于加样槽中吸取 50μl PBS 加入微量板的第二列，依次加入 50ul PBS 直至最后一列。

2）加入待检病毒：单道加样器吸取 100 μl 待检病毒液，加入已标记好的微量板的第一列相对应的孔内。最后的 H1 孔内加 100ulPBS 作为红细胞对照。

3）8 道加样器从第一列的各孔分别取 50ul 病毒液，加入到第二列的相应的各孔，混匀数次。依次从微量板的第二列至第十二列做二倍系列稀释。最后一列每孔弃去 50μl 液体。

（3）稀释好后加鸡红细胞：8 道加样器于加样槽中吸取 50 μl 红细胞悬液。每孔加入 50μl1％ 的红细胞悬液，轻弹微量板，使红细胞与病毒充分混合。

（4）混匀后室温静止。

3．结果判断

（1）血球凝集结果：
＋＋＋＋：指红细胞均匀铺在管底；
＋＋＋：指红细胞铺在管底，面积稍小，边缘不整齐；
＋＋：指红细胞形成一个小团，周围有小凝集块者；
＋：指红细胞形成一个小团，但边缘不整齐有小凝集块者；
-：为无凝集，红细胞于孔底形成一个小团。

（2）血凝滴度计算：以出现「＋＋」的稀释度的倒数为判定终点，即为 1 个血凝单位。

4 个血凝单位计算：等于血凝单位（1：640）除以 4，即标本稀释到 1：160 时含 4 个血凝单位。