改良 Leifson 氏染色法
一、简介细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为 0.01 ~0.02 μm， 所以，除了很少数能形成鞭毛束（由多根鞭毛构成）的细圈可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在
一、简介
细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为 0.01 ~0.02 μm， 所以，除了很少数能形成鞭毛束（由多根鞭毛构成）的细圈可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察。要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。
鞭毛染色方法很多，本实验介绍硝酸银染色法和改良的 Leifson 氏染色法，前一种方法更容易掌握，但染色剂配制后保存期较短。
二、操作方法
改良 Leifson 氏染色法
三、原理
鞭毛染色的基本原理，是在染色前先用媒染剂处理含使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
四、材料与仪器
苏云金芽孢杆菌 假单胞菌 金黄色葡萄球菌
Leifson 氏鞭毛染色液 0.01％ 美蓝水溶液
载玻片 盖玻片 凹载玻片 无菌水 凡士林 显微镜
Leifson 氏鞭毛染色液 0.01％ 美蓝水溶液
载玻片 盖玻片 凹载玻片 无菌水 凡士林 显微镜
五、步骤
1. 载玻片的准备 菌种材料的准备同硝酸银染色法。
2. 制片
用记号笔在载玻片反面将玻片分成 3～4 个等分区。在每一小区的一端放一小滴菌液。将玻片倾斜，让菌液流到小区的另一端，用滤纸吸去多余的菌液。室温或 37 ℃ 温室自然干燥。
3. 染色
加 Leifson 氏染色液覆盖第一区的涂面，隔数分钟后，加染液于第二区涂面，如此继续染第三四区。间隔时间自行议定，其目的是为了滴定最佳染色时间。在染色过程中仔细观察，当整个玻片都出现铁锈色沉淀、染料表面现出金色膜时，即直接用水轻轻冲洗（不要先倾去染料再冲洗。否则背景不清），染色时间大约 10 min，自然干燥。
4. 镜检
干后用油镜观察。
菌体和鞭毛均呈红色。
六、注意事项
1. 玻片要求光滑、洁净，尤其忌用带油迹的玻片（将水滴在玻片上。无油迹破片水能均匀散开）。
2. 挑菌时，尽可能不带培养基。
3. 不要先倾去染料再冲洗。否则背景不清。
七、常见问题
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