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微生物学

间接免疫荧光法检测人类巨细胞病毒早期抗原(HCMV-EA)

2024-04-23 微生物学 加入收藏
原理人类巨细胞病毒(HCMV)感染细胞后,经短期培养48~72 小时,可产生早期蛋白抗原(HCMV-EA),应用已知抗HCMV-EA 的单克隆抗体(McAb-2

原理

人类巨细胞病毒(HCMV)感染细胞后,经短期培养48~72 小时,可产生早期蛋白抗原(HCMV-EA),应用已知抗HCMV-EA 的单克隆抗体(McAb-20 K)与之结合,再加入荧光素(FITC)标记羊抗人IgG 荧光抗体,在荧光镜下检查,可见细胞核内或胞浆内有黄绿色荧光。

材料与仪器

步骤

将已经处理的待检尿液混合于人胚肺纤维母细胞(HEL)中,然后用4 号针头滴加于印有小孔的灭菌玻片上,放CO孵育箱中,37 ℃短期培养(48~72 小时)制抗原滴片。

取出抗原滴片,冷丙酮固定30 分钟。

用0.0l mol/L pH7.8 PBS 漂洗一次,滴加一定稀释度的HCMVAb-20 K 37 ℃孵育2 小时。

取出抗原滴片再用PBS 冲洗三次,吸干滴加FITC 标记的羊抗人IgG 荧光抗体,置37 ℃2 小时。

再经PBS 洗涤三次,吸干,滴加甘油缓冲液于荧光显微镜下镜检。

同法,用HCMV AD139 株感染细胞制片及HEL 细胞片分别作阳性和阴性对照。

结果判断:

同一抗原片标本上有3 个视野,或一个视野中有2 个以上阴性荧光细胞,判为阳性。


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