间接免疫荧光法检测人类巨细胞病毒早期抗原（HCMV-EA）

人类巨细胞病毒（HCMV）感染细胞后，经短期培养48～72 小时，可产生早期蛋白抗原（HCMV-EA），应用已知抗HCMV-EA 的单克隆抗体（McAb-20 K）与之结合，再加入荧光素（FITC）标记羊抗人IgG 荧光抗体，在荧光镜下检查，可见细胞核内或胞浆内有黄绿色荧光。

将已经处理的待检尿液混合于人胚肺纤维母细胞（HEL）中，然后用4 号针头滴加于印有小孔的灭菌玻片上，放CO2 孵育箱中，37 ℃短期培养（48～72 小时）制抗原滴片。

取出抗原滴片，冷丙酮固定30 分钟。

用0.0l mol/L pH7.8 PBS 漂洗一次，滴加一定稀释度的HCMVAb-20 K 37 ℃孵育2 小时。

取出抗原滴片再用PBS 冲洗三次，吸干滴加FITC 标记的羊抗人IgG 荧光抗体，置37 ℃2 小时。

再经PBS 洗涤三次，吸干，滴加甘油缓冲液于荧光显微镜下镜检。

同法，用HCMV AD139 株感染细胞制片及HEL 细胞片分别作阳性和阴性对照。

结果判断：

同一抗原片标本上有3 个视野，或一个视野中有2 个以上阴性荧光细胞，判为阳性。