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微生物学

EB 病毒 VCA-IgA 试验

2024-04-23 微生物学 加入收藏
原理用带EB 病毒衣壳抗原的类淋巴细胞作抗原靶细胞,可与病人血清中的VCA--IgA 抗体结合,形成抗原抗体复合物,再与酶标抗人IgA 抗体结合,加入底物后酶催

原理

用带EB 病毒衣壳抗原的类淋巴细胞作抗原靶细胞,可与病人血清中的VCA--IgA 抗体结合,形成抗原抗体复合物,再与酶标抗人IgA 抗体结合,加入底物后酶催化底物变为有色产物,使靶细胞着色,产物的量与病人血清中的抗体量直接相关,故可根据颜色反应的深浅对抗体定量分析。

材料与仪器

步骤

取冷存的EB 病毒抗原靶细胞涂片置室温中吹干。

用0.01 M,pH7.4 PBS 将即检血清作1:5,1:10 ,1:20 稀释,将各稀释度血清滴加至细胞涂片的小圆穴中,勿使液体外溢。

置于湿盒中在37 ℃温箱作用30 分钟,用同一PBS 浸洗三次,每次5 分钟,末次浸洗后在室温中吹干。

滴加酶标抗体于各小圆穴内,置湿盒中在37 ℃作用60 分钟,同上法浸洗三次。

将新鲜配制的底物溶液滴加在整个涂片上,避光作用10 分钟后,倾去底物溶液,置于无水乙醇中浸3 分钟使脱水。

滴加中性树胶于涂片上,加盖玻片封固,在低倍显微镜下观察结果。

结果判断:
阴性细胞:细胞不着色,或呈浅棕色与背景相同。

阳性细胞:细胞显示不同程度的棕色,胞膜染色较深,细胞表面可见棕色颗粒。

按阳性细胞着色强度和数量,将阳性分为四级:

++++:每个视野内有100 个以上阳性细胞,是深棕色;

+++:每个视野内有数十个阳性细胞,呈棕色;

++:每个视野内有少数阳性细胞,是淡咖啡色;

+:在若干个视野内才见少数阳性细胞,呈淡咖啡色。

常见问题

此法简便敏感,适于对人群普查鼻咽癌,有助于早期诊断鼻咽癌。

有助于诊断和鉴别诊断鼻咽癌:用VCA-IgA 试验检测鼻咽癌患者,抗体阳性率在90% 以上,抗体滴度1:10 以上或滴度持续上升者,对鼻咽癌有辅助诊断意义。鼻咽癌患者抗体滴度较高,其他肿瘤和正常人血清的抗体阳性率均在6% 以下,且抗体滴度低。

有助于判断疗效和预后:病人疗效显著时,血清中的VCA-IgA 抗体逐渐下降或消失;疗效差,鼻咽癌复发或远处转移时抗体滴度回升。


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