固体培养基配制实验
一、简介固体培养基可以分为两类:（1）一类是用天然的固体状物质制成的，如用马铃薯块、麸皮、米糠、豆饼粉、花生饼粉制成的培养基，酒精厂、酿造厂等常用这种培养基;（
一、简介
固体培养基可以分为两类:（1）一类是用天然的固体状物质制成的，如用马铃薯块、麸皮、米糠、豆饼粉、花生饼粉制成的培养基，酒精厂、酿造厂等常用这种培养基;（2）另一类是在液体中添加凝固剂而制成的，如实验室中常用的琼脂固体斜面和固体平板培养基。这种培养基广泛用于微生物的分离、鉴定、保藏、计数及菌落特征的观察等。
二、操作方法
固体培养基配制实验
三、原理
固体培养基的凝固剂一般不是微生物的营养成分，只起固化作用。理想的凝固剂应具备以下条件:不会被微生物分解利用;不会因高温灭菌而受到破坏;在微生物生长的温度范围内保持固体状态;对微生物及操作人员均无毒害作用;透明度好、凝固力强;价格低廉，配制方便。常用的凝固剂是琼脂。琼脂的主要成分是硫酸半乳聚糖，绝大多数微生物都不能分解利用它。琼脂的熔点为96℃，凝固点为40℃，因此，在一般的培养条件下都呈固体状态，而且透明度强。正是这些优良特性，使琼脂取代了早期使用的明胶而成为常用的凝固剂。
材料与仪器
琼脂 胰化蛋白胨 NaCl NaOH 四环素
玻璃瓶 烧瓶
玻璃瓶 烧瓶
步骤
一、极限培养基平板
800 ml水加入15 g琼脂，高压灭菌15 min。然后加人200 ml无菌的5 X 极限培养液和碳源。待冷却至50℃，加人补充成分。每个10 cm平板倒入32~40 ml 培养基（每升培养基可制作25〜30个平板）。于室温干燥2〜3天，或将平板的上盖稍 微打开，于37℃或在层流通风橱干燥30 min，将晾干的平板包裹好储存于4℃。
二、丰富培养基平板
将水加人以下所列出的培养基配方的成分中，定容至1L，高压灭菌25 mm。待冷却至50℃，加人补充成分。每个LB或H培养基平板倒人32~40 ml培养基（每升培养基可制作25〜30个平板），每个λ肉汤培养基平板倒人约45 ml培养基（每升培养基可制作20个平板）。平板的干燥和保存如上所述。
1. H 平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
8 g NaCl
15 g 琼脂
2. λ肉汤平板，每升
2. 半乳糖苷（如果需要）：
X-gal终浓度为 20 ug/ml
1. 穿刺培养基，每升
10 g 营养肉汤
5 g NaCl
6 g 琼脂
10 mg 半胱氨酸盐-Cl
10 mg 胸腺嘧啶
800 ml水加入15 g琼脂，高压灭菌15 min。然后加人200 ml无菌的5 X 极限培养液和碳源。待冷却至50℃，加人补充成分。每个10 cm平板倒入32~40 ml 培养基（每升培养基可制作25〜30个平板）。于室温干燥2〜3天，或将平板的上盖稍 微打开，于37℃或在层流通风橱干燥30 min，将晾干的平板包裹好储存于4℃。
二、丰富培养基平板
将水加人以下所列出的培养基配方的成分中，定容至1L，高压灭菌25 mm。待冷却至50℃，加人补充成分。每个LB或H培养基平板倒人32~40 ml培养基（每升培养基可制作25〜30个平板），每个λ肉汤培养基平板倒人约45 ml培养基（每升培养基可制作20个平板）。平板的干燥和保存如上所述。
1. H 平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
8 g NaCl
15 g 琼脂
2. λ肉汤平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
2.5 g NaCl
10 g 琼脂
3. LB平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
5 g 酵母提取物
5 g NaCl
1 ml 1 mol/L NaOH
15 g 琼脂或者琼脂糖
2.5 g NaCl
10 g 琼脂
3. LB平板，每升
10 g 胰化蛋白胨
5 g 酵母提取物
5 g NaCl
1 ml 1 mol/L NaOH
15 g 琼脂或者琼脂糖
三、添加物
其他的抗生素和半乳糖苷
1. 抗生素（如果需要）：
氨苄青霉素 50 ug/ml
其他的抗生素和半乳糖苷
1. 抗生素（如果需要）：
氨苄青霉素 50 ug/ml
四环素12 ug/ml
2. 半乳糖苷（如果需要）：
X-gal终浓度为 20 ug/ml
IPTG终浓度为0. I mmol/L
四、顶层琼脂培养基
顶层琼脂培养基常用于将噬菌体或细胞在平板的表面均匀分布成一薄层。以1 L的 批量配制顶层培养基，高压灭菌15 min使之熔化，冷却至50℃，轻轻旋转晃动使其混 合均匀，分装至100 ml瓶中。再次高压灭菌，冷却，拧紧盖子，于室温保存。使用前， 用水浴或者微波炉熔化顶层琼脂，冷却至45〜50℃并维持在该温度。顶层琼脂中琼脂 的含量比普通平板的少，在该温度下，顶层琼脂可保持熔化状态数天。
1. LB 顶层培养基，每升
10 g 胰化蛋白胨
5 g 酵母提取物
5 g NaCl
7 g 琼脂
四、顶层琼脂培养基
顶层琼脂培养基常用于将噬菌体或细胞在平板的表面均匀分布成一薄层。以1 L的 批量配制顶层培养基，高压灭菌15 min使之熔化，冷却至50℃，轻轻旋转晃动使其混 合均匀，分装至100 ml瓶中。再次高压灭菌，冷却，拧紧盖子，于室温保存。使用前， 用水浴或者微波炉熔化顶层琼脂，冷却至45〜50℃并维持在该温度。顶层琼脂中琼脂 的含量比普通平板的少，在该温度下，顶层琼脂可保持熔化状态数天。
1. LB 顶层培养基，每升
10 g 胰化蛋白胨
5 g 酵母提取物
5 g NaCl
7 g 琼脂
2. γ顶层球脂培基，每升
10 g 胰化蛋白胨
2.5 g NaCl
7 g 琼脂
3. 顶层琼脂糖培养基，每升
10 g 胰化蛋白胨
8 g NaCl
6 g 琼脂糖
2.5 g NaCl
7 g 琼脂
3. 顶层琼脂糖培养基，每升
10 g 胰化蛋白胨
8 g NaCl
6 g 琼脂糖
五、穿刺琼脂培养基
穿刺琼脂培养基用来保存菌株。加人胸腺嘧啶则可使thy-细菌生长。据认为，半胱氨酸可很大程度地延长细菌在穿刺培养物中的存活时间。
穿刺琼脂培养基用来保存菌株。加人胸腺嘧啶则可使thy-细菌生长。据认为，半胱氨酸可很大程度地延长细菌在穿刺培养物中的存活时间。
1. 穿刺培养基，每升
10 g 营养肉汤
5 g NaCl
6 g 琼脂
10 mg 半胱氨酸盐-Cl
10 mg 胸腺嘧啶
注意事项
1、当高压灭菌锅显示锅内温度达到121℃时开始计时，使温度稳定在121℃以上（锅内压力严禁超过0.165 M Pa），保持15-20min。
2、切断电源，让高压灭菌锅自然冷却，必须等压力降到0.05 M Pa以下时打开排气阀。
2、切断电源，让高压灭菌锅自然冷却，必须等压力降到0.05 M Pa以下时打开排气阀。
常见问题
理想的凝固剂应具备以下条件：
①不被所培养的微生物分解利用；
②在微生物生长的温度范围内保持固体状态，在培养嗜热细菌时，由于高温容易引起培养基液化，通常在培养基中适当增加凝固剂来解决这一问题；
③凝固剂凝固点温度不能太低，否则将不利于微生物的生长；
④凝固剂对所培养的微生物无毒害作用；
⑤凝固剂在灭菌过程中不会被破坏；
⑥透明度好，粘着力强；
⑦配制方便且价格低廉。实验用的凝固剂有琼脂、明胶和硅胶，后者用于配制自养微生物的固体培养基。对其他多数微生物来讲，以琼脂最为合适，一般加入1.5—2.5%即可凝固成固体。此培养基可供分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏等用。
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