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微生物学

酵母菌RNA制备实验

2024-05-09 微生物学 加入收藏
一、简介原理酵母核酸中RNA含量较多,DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,可加乙醇使其沉淀,有此可得粗RNA制品。 二、操作方法酵母菌RN

一、简介

原理酵母核酸中RNA含量较多,DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,可加乙醇使其沉淀,有此可得粗RNA制品。

 二、操作方法

酵母菌RNA制备实验

 三、材料与仪器

酵母菌
TES 酸性酚 氯仿 乙酸钠 乙醇
离心管 离心机 摇床

步骤

1. 酵母细胞在10 ml 培养基中生长至指数中期(OD600=1.0)。
2. 将培养液转移到50 ml,离心管,于4℃,1 500 g 离心3 min。
3. 弃上清,菌体沉淀用1 ml 冰冷的水重悬,转移至一个干净的1.5 ml 微量离心管中, 4℃离心10 s,弃上清,继续步骤4。需要时,将离心管置于干冰上速冻。
4. 用400 μl TSE溶液重悬细胞沉淀,加400 μl 酸性酚,激烈振荡10 s,65℃温育30~60 min,不时用旋涡振荡器短暂振荡。
5. 冰浴放置5 min,4℃高速离心5 min。
6. 水(上)相移到一个干净的1.5 ml 微量离心管中,加400 μl 酸性酚,激烈振荡,重复步骤5。
7. 将水相移到一个干净的1.5 ml 微量离心管中,加入400 μl 氯仿,激烈振荡,4℃高速离心5 min。
8. 将水相移到一个新管中,加40 μl 3mol/l 乙酸钠,pH5.3及1 ml 冰冷的无水乙醇沉淀,4℃高速离心5 min,在冰冷的70%乙醇中快速振荡以洗涤RNA沉淀。如上离心以沉淀RNA。
9. 沉淀用50 μl 水重溶,用分光光度法测A260及A280以确定浓度,于-70℃或-20℃贮存,可使用1年。

注意事项

不要用高浓度的细胞制备RNA,因为进入静止期后,结果的一致性差,RNA产量不稳定。


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