酵母菌DNA制备实验
一、简介酵母分子生物学研究常常需要分离质粒及酵母菌染色体DNA，质粒DNA用来转化大肠扞菌，而染色体DNA用于Southern 杂交分析，聚合酶链式反应法体外扩
一、简介
酵母分子生物学研究常常需要分离质粒及酵母菌染色体DNA，质粒DNA用来转化大肠扞菌，而染色体DNA用于Southern 杂交分析，聚合酶链式反应法体外扩增或整合性质粒的克隆。
二、操作方法
酵母菌DNA制备实验
三、材料与仪器
酵母
YPD 破菌缓冲液 酚 氯仿 异戊醇 LB
玻璃珠 试管 摇床 培养箱 离心机
步骤
1. 注盛于一个13 mm×100 mm 无菌玻璃试管中的2 ml 培养基接种含有带目的基因的质粒的酵母单菌落，在转动或摇动培养箱中30℃过夜培养到静止期。
2. 将1.5 ml 的过夜培养物转移到微量离心管中，室温高速离心5 s，倒掉上清，快速振荡分散沉淀物。
3. 细胞用200 μl 破菌缓冲液重悬，加0.3 g 玻璃珠（约200 μl 体积）及200 μl 酚/氯仿/异戊醇，在漩涡混合器上高速振荡2 min，室温高速离心5 min。
4. 取1~2 μl 水相转化感受态大肠杆菌只HB101或MH1，涂布在带有合适的抗生素的LB平板上以质粒上的抗药性标志进行选择。
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