(酵母菌RNA制备实验)备选方案2(poly(A)+法)
一、简介原理酵母核酸中RNA含量较多,DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,可加乙醇使其沉淀,有此可得粗RNA制品。 二、操作方法(酵母菌R
一、简介
原理酵母核酸中RNA含量较多,DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,可加乙醇使其沉淀,有此可得粗RNA制品。
二、操作方法
(酵母菌RNA制备实验)备选方案2(poly(A)+法)
三、材料与仪器
酵母菌
酚 氯仿 异戊醇
玻璃珠 试管 摇床 培养箱 离心机
步骤
一、热酸酚方案(基本方案1)
1. TES及酸酚溶液的体积增加到4 ml。
2. 操作时使用50 ml 聚丙烯离心管。
3. 将得到大约10 mg RNA。
1. TES及酸酚溶液的体积增加到4 ml。
2. 操作时使用50 ml 聚丙烯离心管。
3. 将得到大约10 mg RNA。
二、玻璃珠方案(备择方案1)
1. 将体积增加到15 ml RNA缓冲液10 ml 体枳玻璃珠,15 ml 酚/氯仿/异戊醇,及30 ml 无水乙醇在50 ml 一次性聚丙烯管中继续各步骤。
2. 每歩酚抽提后用固定角或吊桶式转子于4℃,1 200 g 离心10 min。
3. 在相同条件下离心可以较好地回收沉淀的核算,总RNA的产量约5 mg。
1. 将体积增加到15 ml RNA缓冲液10 ml 体枳玻璃珠,15 ml 酚/氯仿/异戊醇,及30 ml 无水乙醇在50 ml 一次性聚丙烯管中继续各步骤。
2. 每歩酚抽提后用固定角或吊桶式转子于4℃,1 200 g 离心10 min。
3. 在相同条件下离心可以较好地回收沉淀的核算,总RNA的产量约5 mg。