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微生物学

(酵母菌RNA制备实验)备选方案2(poly(A)+法)

2024-05-09 微生物学 加入收藏
一、简介原理酵母核酸中RNA含量较多,DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,可加乙醇使其沉淀,有此可得粗RNA制品。 二、操作方法(酵母菌R

一、简介

原理酵母核酸中RNA含量较多,DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,可加乙醇使其沉淀,有此可得粗RNA制品。

 二、操作方法

(酵母菌RNA制备实验)备选方案2(poly(A)+法)


 三、材料与仪器

酵母菌
酚 氯仿 异戊醇
玻璃珠 试管 摇床 培养箱 离心机

步骤

一、热酸酚方案(基本方案1)

1. TES及酸酚溶液的体积增加到4 ml。

2. 操作时使用50 ml 聚丙烯离心管。

3. 将得到大约10 mg RNA。
二、玻璃珠方案(备择方案1)

1. 将体积增加到15 ml RNA缓冲液10 ml 体枳玻璃珠,15 ml 酚/氯仿/异戊醇,及30 ml 无水乙醇在50 ml 一次性聚丙烯管中继续各步骤。

2. 每歩酚抽提后用固定角或吊桶式转子于4℃,1 200 g 离心10 min。

3. 在相同条件下离心可以较好地回收沉淀的核算,总RNA的产量约5 mg。




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