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DNA实验

聚丙烯酰胺凝胶中DNA的染色检测

2024-05-20 DNA实验 加入收藏
原理与琼脂糖凝胶不同,聚丙烯酰胺凝胶灌制时不能加入溴化乙锭,因为此染料会影响丙烯酰胺的聚合。然而,电泳后可用溴化乙锭进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。由于聚 丙烯酰胺会


原理

与琼脂糖凝胶不同,聚丙烯酰胺凝胶灌制时不能加入溴化乙锭,因为此染料会影响丙烯酰胺的聚合。然而,电泳后可用溴化乙锭进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。由于聚 丙烯酰胺会猝灭溴化乙锭的荧光,所以检测 DNA 的灵敏度降低。电泳后也可用核酸染料SYBR Gold ( Molecular Probes) 进行聚丙烯酰胺凝胶的染色。它也不能在聚合过程中掺入到凝胶中,这样会妨碍 DNA 的迁移并使 DNA 条带变形。亚甲蓝染色检测的灵敏度低,但较之前两种染料价格低廉,也可选用。

材料与仪器

溴化乙锭溶液 SYBR Gold 贮存液或亚甲蓝贮存液
聚丙烯酰胺凝胶

步骤

一、材料

1. 缓冲液和溶液

染料溶液:溴化乙锭溶液(贮存液 0.5 μg/ml ), SYBR Gold 贮存液或亚甲蓝贮存液(0.001%~0.0025%, TAE 缓冲液配制)

2. 凝胶

聚丙烯酰胺凝胶

二、方法

1. 将凝胶及其附着的玻璃板轻轻地浸入需用染色液中,染色液正好将凝胶没住即可。室温染色 30~45 min。

2. 以玻璃板为支撑物将凝胶从染色液中取出,水冲洗后用一叠 Kimwipes 纸巾蘸去凝胶表面多余的液体。

3. 用一张 Saran Warp 膜覆盖在凝胶上,用梳子宽的一端或折叠的 Kimwipe 纸巾除去 Saran Wrap 膜中的气泡或皱褶。

4. 在紫外透射光源上放一张 Saran Wrap 膜,将凝胶倒置,放在透射光源上,移去玻璃板,凝胶便留在 Saran Wrap 膜上。

5. 凝胶摄影参见方案“琼脂糖凝胶中 DNA 的检测”。
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