盘点 5 大常见细胞系与培养经验
细胞培养，是科研的第一步！不同领域研究会用到不同细胞系品类或者原代细胞，有贴壁细胞，也有悬浮细胞，不同细胞有着不同的生长习惯。
培养基的选择，就成了这些细胞生长状态的第一保障。选择培养基没有一定的标准，本文梳理 8 个常见细胞系，以及培养基选择方案供大家参考！
1. CHO-K1 细胞
CHO-K1 细胞是实验中非常常用的一个细胞株，在生物制药中使用也非常广泛。该细胞株培养条件简单，贴壁强度适中，比较容易转染，很适合用它来研究一般哺乳动物基因的功能。
来源：Cricetulus griseus (中国仓鼠) 卵巢
形态：表皮细胞
生长特性：贴壁
注释：CHO-K1 由 CHO 衍生而来，CHO 是 T. T. Puck 在 1957 年从一只成年中国仓鼠卵巢获得的。
培养液：Ham's F12K（含 2 mM L - 谷氨酰胺，1.5 g/L NaHCO3），10% 胎牛血清。
传代：吸去培养液。 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA 洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加 2 - 3 毫升 Trypsin-EDTA，放在 37 ℃ 培养箱内约 5 分钟，直到细胞全部脱落。加 6 - 8 毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以 1：4 到 1：8 为宜，传代期间培养液更换 1 - 2 次）
冻存：95% 培养液 + 5% DMSO 冻存于液氮。
2. 293 细胞
293 细胞比较容易转染，是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。293 细胞的一个衍生株：293T/ 17 的转染效率更高，成为广大研究者研究基因功能的一个强大工具。
293 细胞的缺陷是生长过程中贴壁强度比较小。所以在实验过程中容易流失，从而影响实验结果。如果一个实验室新得到的 293 细胞是邮寄得到的并且细胞在培养瓶中，就需要让细胞沉降几天时间，因为大量细胞会漂浮在培养液里。
来源：人体肾脏
形态：上皮细胞
生长特性：贴壁
注释：该细胞含腺病毒 5 DNA 。
培养液： MEM（含 2 mM L - 谷氨酰胺和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸，1.0 mM 丙酮酸钠）， 10% 马血清（热灭活）。
传代： 吸去培养液。 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA 洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加 2 - 3 毫升 Trypsin-EDTA，放在 37 ℃ 培养箱内约 5 分钟，直到细胞全部脱落。加 6 - 8 毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以 1:2 到 1:4 为宜，传代期间培养液 2 - 3 天更换 1 次）
冻存：95% 培养液 + 5% DMSO 冻存于液氮。
3. Vero 细胞
Vero 细胞被成功的用来培养狂犬病疫苗、乙脑疫苗等多种疫苗，在非典期间又为研究冠状病毒做出贡献，在医药研究种广泛应用。
来源： 非洲绿猴肾细胞
形态：上皮细胞
生长特性：贴壁
注释：该细胞是日本千叶大学的 Y. Yasumura 和 Y. Kawakita 于 1962 年 3 月 27 日从一只正常的成年非洲绿猴肾组织培养出来的。
培养液：MEM（含 2 mM L - 谷氨酰胺和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸，1.0 mM 丙酮酸钠）， 10% 胎牛血清
传代：吸去培养液。 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA 洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加 2 - 3 毫升 Trypsin-EDTA，放在 37℃ 培养箱内约 5 分钟，直到细胞全部脱落。加 6 - 8 毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以 1:3 至 1:6 为宜，传代期间培养液每周更换 2 - 3 次）
冻存： 95% 培养液 + 5% DMSO 冻存于液氮。
4. NIH- 3T3 细胞
NIH- 3T3 细胞在实验室常用来做转染及基因表达的研究。易感病毒有鼠肉瘤病毒和鼠白血病毒。
来源： Mus musculus（小家鼠）胚胎
形态：成纤维细胞样
生长特性：贴壁
注释：为得到适合转染得细胞株，NIH- 3T3 细胞至少连续克隆过 5 次。NIH- 3T3 细胞容易转染 DNA，鼠痘病毒阴性。
培养液：DMEM（含 4 mM L - 谷氨酰胺、4.5 g/L 葡萄糖、1.5 g/L 碳酸氢钠），10% 小牛血清
传代：吸去培养液。（不要让细胞长满培养器皿，长满 80% 为宜）用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA 洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加 2 - 3 毫升 Trypsin-EDTA，放在 37℃ 培养箱内约 5 分钟，直到细胞全部脱落。加 6 - 8 毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以 3 - 5x103 /cm2 为宜，传代期间培养液每周更换 2 次）
冻存： 95% 培养液 + 5% DMSO 冻存于液氮。
5. PC- 12 细胞
PC- 12 细胞是一个常用的神经细胞株。
来源： Rattus norvegicus (褐家鼠) 肾上腺嗜铬细胞瘤（一种交感神经系统的肿瘤）
形态：多角型细胞
生长特性：贴壁较松，容易成团
注释：PC- 12 细胞株来源于一种可移植的鼠嗜铬细胞瘤，该细胞对神经生长因子（NGF）有可逆的神经元显形反应，该细胞不合成肾上腺素。
培养液：Ham's F12K（含 2 mM L - 谷氨酰胺，1.5 g/L NaHCO3）+ 15% 马血清 + 2.5% 胎牛血清。
传代：吸去培养液。加入新的培养液，用吸管吹下细胞或用手拍打培养瓶或刮下细胞到培养液中，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以 1:4 为宜，传代期间 2 - 3 天更换培养液）
冻存：95% 培养液 + 5% DMSO 冻存于液氮。
6. Hela 细胞
Hela 细胞是在所有细胞株中最著名的。它来源于美国的 Helen Lane，她 1951 年死于子宫颈癌。但源自她的肿瘤的细胞却在世界各地的实验室中得到广泛的使用。
来源：人宫颈癌
形态：上皮细胞
生长特性：贴壁
注释：Hela 细胞显角蛋白免疫沉淀染色阳性，包含 HPV- 18 序列，有正常水平的 pRB 和 p53 的低水平表达。
培养液：MEM（含 2 mM L - 谷氨酰胺和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸，1.0 mM 丙酮酸钠）， 10% 胎牛血清
传代：吸去培养液。用 0.25%（w/v）Trypsin- 0.53 mM EDTA 洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶活性）。加 2 - 3 毫升 Trypein-EDTA，放 37℃ 培养箱内约 5 分钟，直到细胞全部脱落。加 6 - 8 毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以 1:2 到 1:6 为宜，每周传代 2 - 3 次）
冻存：95% 培养液 + 5% DMSO 冻存于液氮。
7. Sf9 细胞
Sf9 细胞常在 Baculovirus（杆状病毒）表达系统中用作宿主细胞，来表达外源蛋白。
来源：叙利亚仓鼠肾细胞
形态：纤维原细胞
生长特性：贴壁
注释：这个细胞来自于一只出生一天的新生仓鼠，随后被改造成一个易于作表达的宿主细胞株。
培养液：MEM（含 2 mM L - 谷氨酰胺和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸，1.0 mM 丙酮酸钠）+ 10% 胎牛血清
传代：吸去培养液。用 0.25%（w/v）Trypsin- 0.03 mM EDTA 洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶活性）。加 2 - 3 毫升 Trypein-EDTA，放 37℃ 培养箱内约 5 分钟，直到细胞全部脱落。加 6 - 8 毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以 1:2 到 1:10 为宜，每周传代 1 - 2 次）
冻存：95% 培养液 + 5% DMSO 冻存于液氮。
8. HepG2 细胞
Hep G2 细胞来源于一个 15 岁白人的肝癌组织。该细胞分泌多种血浆蛋白：清蛋白、α2 - 巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原、铁传递蛋白等。该细胞能大容量培养，乙肝表面抗原阴性，对 G418 有抗性，对人生长激素有刺激反应。
来源：人肝癌细胞
形态：上皮细胞
生长特性：贴壁
注释：该细胞表达 3 - 羟基 - 3 - 甲基戊二酸辅酶 A 还原酶和肝甘油三酸脂脂肪酶。该细胞在有百草枯 (英文名：gramoxone) 的环境下过氧化氢酶 mRNA 表达增加，ApoA-I mRNA 表达减少。
培养液：MEM（含 2 mM L - 谷氨酰胺和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3，0.1 mM 非必需氨基酸，1.0 mM 丙酮酸钠）+ 10% 胎牛血清。
传代：吸去培养液。 用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA 洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。加 2 - 3 毫升 Trypsin-EDTA，放在 37℃ 培养箱内约 5 分钟，直到细胞全部脱落。加 6 - 8 毫升培养液，用移液器把细胞吹散。加适量的细胞到新的培养器皿中。（以 1:4 至 1:6 为宜，传代期间培养液每周更换 2 次）
冻存：95% 培养液 + 5% DMSO 冻存于液氮。
当然，还有以下这些！
说明：以上数据来源于 ATCC
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