用于 PCR 的模板 DNA 制备实验（含血标本）

1. 3 ml 外周血或 1 ml 骨髓液放入含 50 μl 0.5mol/L EDTA 的无菌离心管（15 ml 管）中。

2. 2000 r/min 离心 10 min。吸去血浆，用指弹匀剩余的有核细胞和红细胞，加入红细胞溶解液 10 ml 并混匀，常温下放置 30 min。红细胞溶解液配制：NH4Cl 4 g，NH4ClO4 3 g，NH4HCO3 0.04 g，加水定容至 1L；灭菌；4℃ 下保存。

3. 2000 r/min 离心 2 min，此时有核细胞成白色团块沉淀于管底。倒出已溶解的红细胞液体，然后用少许红细胞溶解液轻轻清洗剩余红细胞液体并倒出。

4. 用指弹匀沉淀的有核细胞团块，加入 3 ml 组织裂解液并弹匀，37℃ 下放置 30 min 以上。骨髓标本中若含有组织块，可加入 10 μl 蛋白酶 K 以助裂解。

5. 无菌尖头刀片刮下，放入 300～900 μl 组织裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl，封口膜封口，置 55℃ 3 h 以上。

6. 其间用指轻弹离心管以利裂解。若有沉淀，再加入 5～10 μl 蛋白酶 K，直至无沉淀已澄清为止。

7. 灭活蛋白酶 K 裂解液中含有蛋白酶 K，需放入沸水中 10 min 以灭活蛋白酶 K。

8. 沉淀蛋白质按裂解液量的 1/3 加入蛋白质沉淀液（饱和乙酸钠）并混匀，14500r/mm 离心 15 min。此时，蛋白质沉于管底，DNA 溶解于上清液中。

9. 析出 DNA 取上清液并加入等量冷异丙醇，充分混匀，新鲜标本此时可见 DNA 丝缠绕成团析出。若新鲜标本童太少或固定组织因 DNA 片段较小，无法用肉眼见到 DNA 成团析出，需 14500 r/min 再离心 10 min，一般 DNA 可见于管底。