Login
欢迎浏览恩派尔生物资料网
我要投稿 请登录 免费注册 安全退出

您现在的位置是: 首页 > 实验方法 > RNA实验

RNA实验

病毒 RNA 提取实验(TE-饱和酚/氯仿提取法)

2024-06-20 RNA实验 加入收藏
原理大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。材料与仪器TMV病毒液TE


原理

大多植物病毒RNA 为单链RNA ,并且其极性与mRNA 极性相同,植物病毒RNA 提取较为简单,一般使用酚氯仿即可获得满意结果。

材料与仪器

TMV病毒液
TE-饱和酚:氯仿 氯仿 NaAc 乙醇 TE缓冲液 双菌水
冷冻台式离心机 低温真空干燥仪 电泳仪 电泳槽

步骤

一、实验材料准备

1.  材料
 
提纯TMV病毒液(10 mg/ml)。
 
2.  设备
 
冷冻台式离心机,低温真空干燥仪,电泳仪,电泳槽。
 
3.  试剂
 
TE-饱和酚:氯仿(1:1),氯仿,3 M NaAc(pH5.2),乙醇(100%和70%),TE缓冲液,无RNA 酶的双菌水。
 
二、操作步骤
 
1.  取一eppendorf管加入提纯TMV(10 mg/ml)400 ml,再加入等体积酚/氯仿,盖紧管盖后用手充分振荡1分钟,4℃下12 000 g离心10分钟。
 
2.  吸取水相于一新eppendorf管,再用酚/氯仿抽提,直至水相和有机相交界面无蛋白为止。
 
3.  吸取水相于新eppendorf心管,加入等体积氯仿,用手倒置离心管数十秒,4℃下12 000 g离心10分钟。
 
4.  取水相,加入1/10倍体积的3 mol/L NaAc(pH5.2),2.5倍体积的冰冷乙醇,混匀,-20℃30分钟。
 
5.  4℃下12 000 g离心15分钟,小心弃去上清液,用70%乙醇洗涤沉淀,4℃下12 000 g离心5分钟。
 
6.  小心弃去上清液,沉淀真空干燥5分钟或空气干燥10分钟,并溶于无RNA 酶的双菌水或TE缓冲液中。
 
7.  取10 ml进行电泳分析。
 

注意事项

1.  整个操作应尽可能在低温下进行。
 
2.  由于病毒RNA 镶嵌于外壳蛋白里面,因此要充分剥去病毒外壳蛋白,一般需要多次进行酚/氯仿的抽提。


文章底部广告位

文章评论

加载中~