HyClone血清使用的常见问题

血清是什么？

血清是血液凝固析出的淡黄色透明液体，是血浆去除纤维蛋白原后的混合物。主要成分包括蛋白质、氨基酸、糖类和维生素、多肽（如生长因子、胰岛素、促生长激素）等。

细胞和组织培养为什么需要使用血清？

血清通常作为补充剂，以2-10%的浓度加入培养基中，为细胞提供综合营养、激素、生长和附着因子。血清还可作为细胞培养系统的缓冲液，避免各种因素(包括pH变化、蛋白水解活性或重金属、内毒等)干扰细胞生长或产生毒性作用。

胎牛血清和小牛血清有什么区别？

血清的加工工艺是怎样的？

我们的合作伙伴HyClone有着50年的血清生产经验，生产符合 cGMP(21 CFR 820) 要求，并拥有Oritain 指纹识别技术和完整的文件追踪系统，确保来源可追溯性。产品通过 USDA 安全测试，依据美国联邦法规 9 CFR 113.53 的病毒检测，依据 EMEA 进行BVDV 抗体检测，为了确保瓶间的均一性和一致性，分装前，每个批次都经过过滤并混合（“真混合”工艺）。除此之外，HyClone血清拥有严格的质量控制与产品放行检测，在经历超过50项检测项目之后才可放行。2000 年 ATCC 对 HyClone 血清实行了免检采购，HyClone更是ISIA 协会的会员。

您刚才提到的血清，提供热灭活版本吗？

为了不影响血清的营养成分，HyClone血清不提供热灭活版本，但每个批次均通过3个连续的100 nm孔径的系列过滤器进行无菌过滤，可以放心使用。

除此之外，活性炭，辐照等特殊处理的血清也不提供。中国暂时也不提供热灭活哦

血清如何储存呢？

我们建议血清储存在-10℃或更低温度条件下，这是因为HyClone血清产品的效期是基于-10℃储存条件进行的稳定性研究。然而，研究表明储存在-80℃下的血清，在性能方面也没有任何变化，但我们建议不要在-80℃条件下储存，解冻时巨大的温差会导致更多沉淀的产生。一旦解冻，血清可在2-8℃条件下储存6周，如果解冻之后的血清储存时间大于6周，我们建议分装成合适的体积并重新冻存

血清如何解冻呢？

首先将冻存的血清移到2-8℃的冰箱中，过夜；于37℃水浴，间歇性摇晃混匀底部的溶解物。解冻之后的血清不要长时间放置在37℃下。若血清没有混匀且放置于高于40℃的水浴中，底部的蛋白会变性形成沉淀。

如果血清到货时存在部分解冻，还能继续使用嘛？

血清是干冰包装运输，到达时应该是冷冻状态。但是，如果由于运输时间超期导致部分解冻，依然可以继续使用。完全解冻后分装成单次用量进行冻存。

 血清产品的保质期是多久？

大部分血清产品，在未开封冻存的情况下生产之日起5年，具体可参考瓶身或CoA上的信息。 

血清对光敏感吗？

在标准实验室光下正常操作血清不会有太大影响。但血清中确实含有某些对光敏感的组分，因此不建议将血清暴露在高强度或短波光下。

为什么血清会出现沉淀或絮状物质？

血清中出现沉淀的原因很多：

1、反复的冻融会使血清脂蛋白发生变性造成浑浊，可通过分装成单次用量减少冻融来尽量避免此种情况。

2、血清是在低温环境下迅速加工以保持其生长特性，血清中遗留的一些纤维蛋白原在解冻时会转化成纤维蛋白。过量的纤维蛋白在血清中呈现为可见的絮状物质，可通过400xg离心移除。不建议通过过滤血清来移除絮状物质，因为滤器可能堵塞，或者意外截留到重要的蛋白质。

3、除了纤维蛋白之外，磷酸钙也是血清产品中常见的沉淀，通常表现为云状物。倒置显微镜观察，发现许多小黑点。由于布朗运动，这些黑点可自由移动。磷酸钙沉淀物通常被误认为微生物污染。在37℃孵育之后，血清中的磷酸钙沉淀物会增加。因此，我们建议不要直接用37℃孵育的血清测试无菌性。将1 mL的待测血清直接倾倒于细菌琼脂平板（例如胰酪蛋白胨大豆琼脂），37℃培养之后观察菌落的生长情况。油镜（放大1000倍）下观察革兰氏染色，判断是否污染。

测试及经验表明，沉淀不会改变血清作为培养基添加物的性能。这已经被客户及其它厂家证实。

 那么怎么控制沉淀的产生呢？

血清中的沉淀很难预测和阻止，沉淀不会改变血清的性能，但在正确的储存和使用操作会降低血清中沉淀的析出。

如下条件会增加沉淀：

  •血清热灭活；

  •37℃孵育；

  •重复冻存与解冻操作；

  •解冻工程中为未混合；

  •γ-辐照；

  •2-8℃长时间储存；

  •在自动解冻的冰箱中储存

为什么有些血清是热灭活的？如何热灭活？

哺乳动物血清中天然存在的补体蛋白参与细胞溶解事件、收缩平滑肌、从肥大细胞和血小板中释放组胺和激活淋巴细胞和髓细胞。热灭活破坏了血清中补体的活性，因此免疫学应用，培养胚胎干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时推荐使用。 热灭活方法是在56°C水浴中处理30分钟，并每隔大约10分钟旋转一次瓶子。为了保持精确，可使用一个类似大小的瓶子作为对照，对照瓶内放入同等体积的水，并放置一个温度计，在温度到达56°C时开始计时30分钟。热灭活过程必须小心控制，避免血清中支持细胞和组织繁殖的关键蛋白组分发生降解。

为什么血清具有批次间差异？

血清是从生物来源提取的，其成分会存在批次之间的差异。为了尽可能减少应用变化，我们对每个批次均执行严格的质量检测，使用高质量标准，尽可能确保批间一致性。

胎牛血清的颜色和我之前使用的批次不同会影响我的使用效果吗？

血清的颜色取决于血红蛋白浓度，而该参数的差异不会影响血清的性能。

USDA来源和U.S来源血清的区别是什么？

U.S.来源血清是指收集自持续接受USDA检查的美国境内的地区；而USDA来源血清是指收集自美国境外，但经过USDA批准允许进口美国的地区，包括澳大利亚、加拿大、新西兰、智利和中美洲。

 哪些细胞我可以用血清来养呢？

血清营养成分比较丰富，用途比较广，适用于各种癌细胞株，原代细胞，干细胞（胚胎干细胞，间充质干细胞等）的培养。如何添加适当的血清建议您可以咨询实验室有经验的师兄师姐或者查阅文献哦。