固定全细胞的 PI 染色

是一种可对 DNA 染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测。

原理

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料 (红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。用 PI 单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。

如果只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么 PI 单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么 PI 单一染色不够。

细胞
PBS 冷乙醇 PI 溶液
锥形管

1. 分离细胞并移至 15 ml 的锥形管中。检查有单个细胞悬浮，1000 g 离心 5 分钟，弃上清。

2. 用不含 Ca 或 Mg 的 PBS 将细胞洗 2 次，计数细胞总数，记在管山。

3. 用约 500 μl 的 PBS 重悬细胞。

4. 加 5 ml 冷乙醇，4℃ 固定过夜。

5. 取 5X106 细胞放入 15 ml 锥形管中，1000 g 离心，弃乙醇。

6. 悬搅沉淀，用 5 ml PBS+1% BSA 或小牛血清洗 2 次。

7. 用含 1% BSA 或 1% 小牛血清的 800 μl PBS 重悬细胞沉淀。

8. 加 100 μl 10X PI 溶液。

9. 加入 100 μl 煮沸过的 RNA 酶 A，37℃ 孵育 30 分钟。

10. 用流式细胞计量术分析固定的样品。