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DNA实验

远离EB和紫外,检测核酸有没有更好的选择

2024-09-26 DNA实验 加入收藏
话说无论是初接触分子生物学的新手,还是久经考验的“老鸟”,都知道EB染料的有害性,这种有害性表现在三个方面:接触致癌性,紫外观测的诱变性,以及麻烦的后处理。但是

话说无论是初接触分子生物学的新手,还是久经考验的“老鸟”,都知道EB染料的有害性,这种有害性表现在三个方面:接触致癌性,紫外观测的诱变性,以及麻烦的后处理。但是要说到EB的替代品,好像又都不是那么合心意,比如SYBR类染料在紫外下不稳定,容易降解,一些像是GelRed之类的染料虽然毒性低,但是价格却不亲民。

想要避免EB的影响,又不想影响实验的效果,许多实验人员常陷入两难中,另一方面,经典的凝胶成像系统一般都是采用的紫外成像,在这种波长下,EB的灵敏度和价格都是比较合适的,而其它的染料又存在不稳定性这一瓶颈式缺点,所以导致了虽然知道EB的有害性,但许多实验室还是采用EB染料的现状。

国内生物技术自主研发着名企业:百泰克公司2009年推出了新一代的凝胶透射仪,可用于核酸和蛋白质电泳凝胶样品的观察、处理、分析和拍照。

这种凝胶透射仪:UltraPowerTM采用的是可见光光源,如果配合新一代核酸染料UltraPowerTM或者其他花菁类荧光染料,可检测出几十pg的dsDNA,灵敏度比紫外凝胶透射仪配合EB染料高10-25倍。

这是由于花菁染料具有摩尔吸收系数大和荧光量子产率高的优点,通过共轭链长度的调节,花菁的光谱可以从可见光区一直延伸到近红外区,采用红区测量可有效地排除背景干扰,获得更为理想的分析灵敏度和选择性。花菁染料的光谱对外界微环境的变化极为敏感,非常适合生物及环境样品的分析研究。

除此之外,UltraPowerTM可见光凝胶透射仪还可以用于多数荧光染料,比如SYBR Green I、绿色荧光蛋白(EGPF)等(具体染料见附表)。这可以算得上是一套多色荧光成像分析系统,而且UltraPower可以采用普通数码相机拍照,从而摆脱了高昂造价得黑白CCD时代,可以拍出多姿多彩的电泳图片来。


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