CCK8检测细胞增殖/毒性的原理、方法及注意事项

一、CCK8检测细胞增殖/毒性的原理 

用途：药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验

• 使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；
• CCK-8法能快速检测；
• CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；
• CCK-8法的重复性优于MTT 法；
• CCK-8法对细胞毒性小；
• CCK-8细胞活性检测试剂中为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。
  

• 与MTT法相 比，CCK8和XTT的价格比较贵。
• CCK8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。
  

与以往的增殖/毒性测定试剂相比较：

二、CCK8检测细胞增殖/毒性的方法
实验一：细胞增殖分析

6、测定450nm吸光度：建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm。

注：

• 若暂时不测定OD值，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定，吸光度不会发生变化。
• 如果待测物质有氧化性或还原性的话，可在加CCK8之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
  

• 当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。
• 酚红和血清对CCK8法的检测不会造成干扰，可以通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
• CCK8可以检测大肠杆菌，但不能检测酵母细胞。在细胞增殖实验每次测定的过程中需要避免细菌污染，以免影响结果。
• CCK-8在0-5℃下能够保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。
• 当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。
• 在培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验时，还应考虑药物的吸收，可在加入药物的培养基中加入CCK8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。
• 金属对CCK-8显色有影响：当终浓度为1 mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10 mM的话，将会100%抑制。
• 悬浮细胞由于染色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。