RNA提取的流毒非浅的经典误区（RNA提取的实践指南）

最近碰到了好几个RNA提取的初学者来实验室学习如何提取RNA，对于如此简单的操作，却有如此多的人提取不出来，细问一下，原来他们的知识来源都是书本上或者网上的“RNA提取注意事项一类”的所谓经验，其实，他们提取不出来的真正原因。

恰恰是他们严格遵守了所谓的经验，精力全放在不需要注意的地方，结果搞得自己很紧张， 真正需要注意的操作反而没有注意了。

下面我就结合网上常见的RNA 操作注意事项与实验技巧的文章指出提取RNA的流毒非浅的常见误区：1．“ 如果可能，实验室应辟出专门RNA操作区，离心机、移液枪、试剂等均应专用。RNA操作区应保持清洁，并定期进行消毒。”

完全错误，任何普通的试验台，不需要任何消毒，暴露在空气中就可以。用我的话说就是垃圾堆里面我都可以提取出RNA!有的学生告诉我他们在哪里提取的， 他们在超净台里面操作，只有两个孔伸手进去，操作及其不便，还容易使人疲劳，风干RNA沉淀的时候，也看不清楚，常常造成要么干过头，要么乙醇残留高。

空气中有RNA酶污染，还到处乱飘，还会到离心管子里面降解RNA,谁告诉你的？你看见了？你做过实验了？人家说啥你就信？如果真是这样空气到处飘RNA酶，你的电泳槽，电泳仪，电泳液总不可能放到超净台电泳吧？

你配制电泳缓冲液总不能不暴露在空气中吧？电泳液体，电泳槽不知道早就被飘进多少RNA酶了，那还怎么跑电泳，全部降解！可能嘛？更何况超净台空气净化过滤的是细菌大东西，RNA酶蛋白分子那么小它能过滤得掉嘛，所以如果空气中有RNA酶，超净台也挡不住的。稍微分析一下就明白了。

实际上，随便啥普通实验室的试验台提取RNA，几百次了，从未因为没有在超净台提取就降解RNA的。

2．“操作过程中应自始至终佩戴抛弃式橡胶或乳胶手套，并经常更换，以避免将手、臂上的细菌和真菌以及人体自身分泌的RNA酶带入试管或污染用具。尽量避免使用抛弃式塑料手套。塑料手套不贴身，常常造成操作不便，而且多出部分还容易在器具上遭RNA酶污染并向未污染处传递，扩大污染。”

这是流传最广的错误，因为手上的RNA酶，按照正常的操作，怎么可能带到离心管里面？即使沾到离心管壁外面了，对里面的RNA也完全没有影响啊。难道你是崂山道士，不带手套抓住离心管子，手上RNA酶可以透过塑料管穿墙过去降解RNA?

如果你有这个本事，塑料管子都可以穿透，再戴个手套那不也可以穿透？穿2条裤子放屁和穿一条裤子放屁一样挡不住污染大气-多此一举。如果说你不戴手套，你手上的RNA酶多到可以随时掉下来，掉渣，掉到离心管子里面。那不是提取RNA的问题，那是卫生问题，你该洗手或者洗澡了。

除非有人参观，我一般提取RNA根本不注意是否带了手套，戴手套也是为了保护手不沾到苯酚，氯仿。 而不是怕污染。至于扩大污染一说， 完全是胡扯，试验台上早就到处是飞沫，手接触后留下的RNA酶，早就污染完全了，再说，还是我刚才说的，它们怎么可能转到小离心管里面？3．“研钵去干烤”。

不需要，洗干净，晾干就可以了，即使里面有一些RNA酶残留，有液氮的时候如此低的温度下怎么可能降解RNA，转到裂解液后，外源，内源的RNA酶就会被全部抑制。

何况，组织里面那么多的内源性RNA酶研磨的时候都不会降解RNA，残留一点在研钵上的RNA酶就会吗？实际操作，研钵洗干净（避免交叉污染就行），然后晾干，或者用纸擦干就直接用了。残留一点不会影响。4．“操作时候戴口罩，帽子，不说话”。

不需要， 除非你提取的时候唾沫横飞， 而且特别准确，有一滴飞入了你手上拿的1.5毫升的离心管。总之，我边提取的时候， 边要和学生大谈，提取RNA如何如何的简单。5．“用DEPC处理枪头， 小离心管”。

不需要，国外的枪头，离心管散装的，装好在枪头盒里面 ，直接可以用，不需要高压灭菌。国产的我用得不多， 反正我买过浙江产的2分钱一个的离心管，照样不需要DEPC处理，不需要高压，打开了，直接用。

总之做不出来， 首先千万不要找枪头，离心管是国产质量不好的原因。道理很简单，高温高压生产线的塑料管子早就经历了几百度高温的融浆状态，早就RNA酶灭活干净了。

退一万步，即使污染了RNA酶，至少和裂解液接触的枪头离心管子全部不用处理吧？。举个例子，如果用一个污染了RNA酶的枪头去吸取裂解液，会发生下面哪种情况：1.枪头把RNA提取裂解液污染了。2.裂解液把枪头RNA酶给灭活了。想想内源性提取的细胞的那么多RNA都可以被裂解液灭活好好的。枪头一点污染能不灭活？

大家想一下， 当大家经过了网上如此繁琐的错误的注意事项洗礼的时候，他还能有精力去注意提取RNA的重点和真正应该注意的东西在什么地方吗？其实，真正应该注意的就是。。。。。。，我累了，下次说。北京艾德莱生物张老师，RNA提取专家欢迎和大家的交流。