微生物的接种、分离和培养

简介

       微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。在保存菌种时 不慎受到到污染也需予以分纯。微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分 散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。

原理

       微生物的接种分离和培养是做细胞代谢分析和体外实验的基本步骤之一，接种分离的好坏直接影响微生物的培养以及后续的实验操作和结果（1）用于细胞分离（2）细胞纯化（3）细胞增殖培养。

材料与仪器

       大肠杆菌 枯草杆菌 金黄色葡萄球菌  酵母菌  来苏尔 石炭酸溶液 福尔马林 牛肉膏 蛋白胨  恒温培养箱 接种环 酒精灯

步骤

1、微生物接种：指将微生物纯种或含菌材料转移到另一营养基质上的过程。根据不同的目的可以采用不同的接种方法，如平板划线法，涂布法，倾注法等。

2、微生物分离：指依据微生物的特征，采用各种方法从含菌样品中获得由单一个体（如单一菌体或孢子）或一段菌丝生长繁殖形成的微生物群体的过程。常用的分离方法有平板划线法，稀释涂布法，平板分离法，稀释倾注平板分离法和单细胞分离法。 平板分离法的基本原理包括两个方面：

       （1）选择适合于待分离微生物生长条件，如营养、酸碱度、温度和氧的要求或加入某抑制剂造成只利于该微生物生长的环境。

       （2）微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体，因此可以通过挑取单菌落而获得一种纯培养。值得指出的是从微生物群体上生长形成的单个菌落可以并不一定保证是纯培养。3、微生物培养：指微生物被接种到营养基质后，在一定条件下生长繁殖的过程，分需氧培养法和厌氧培养法。注意事项1. 在接种时，需要在酒精灯旁操作，以维持一个相对无菌的环境。接种环与试管口不得任意放在桌上或与其他物品相接触。2. 平板或斜面的划线需要迅速、轻捷，不要划破培养基。

3. 接种完毕后将接种环抽出，灼烧一下管口，塞上硅胶塞，塞硅胶塞时请勿用试管口去迎硅胶塞，以免试管在流动空气中纳入不洁空气。4. 做平板分区划线分离时，划完一小区，均匀将接种环彻底灼伤灭菌，待冷却后再划下一小区。5. 所有的培养器皿均需要严格灭菌。

常见问题

1. 菌落是由单个或少数细胞在固体培养基表面或里面生长繁殖所形成的肉眼可见的子细胞群体。菌落形态会因菌种不同或菌种相同但所用的培养基、培养温度、PH值和时间等条件不同而存在不同程度的差异。若所用的培养基、培养温度和时间条件相同，则同一种菌所形成的菌落形态具有相对的稳定性和统一性。

2. 纯培养的确定除了观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能决定，有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多样性特征鉴定才能确定。