直接从PCR产物回收纯化DNA (Promega 公司试剂盒)

1)直接加90-100μl纯化缓冲液于1.5ml离心管，再加入30～300μl PCR反应物，Vortex混合； 2)加入1ml树脂轻轻Vortex 3次，每次间隔1分钟； 3)将取出拉杆的注射器筒（3ml）装在纯化柱上，加入上述DNA与树脂混合液，然后装上拉杆，慢慢将混合液推进纯化柱内； 4)卸下注射器筒，拔出拉杆，再将注射器筒装上纯化柱，加2ml 80%的Isopropanol（异丙醇）, 然后装上拉杆，慢慢推出液体以清洗柱子； 5)再次卸下注射器筒，将纯化柱装在1.5ml离心管上，10000g离心2 min，以干燥树脂； 6)再将纯化柱装在一个新的1.5ml离心管上，加30-50μl水或TE缓冲液，1分钟后，10000g离心20秒，溶出DNA片段； 7)移去纯化柱，将纯化出的DNA溶液取出部分用于酶切，其余在-20℃下保存备用 补充几点本人在试验过程中的经验： 1）用50～60度温育过的水洗脱可以提高DNA的回收效率； 2）可适当降低离心的转速，让DNA缓慢的通过纯化柱，这样也可以提高DNA的回收效率。