人非小细胞肺癌细胞耐药亚株(A549/DDP)
人非小细胞肺癌细胞耐药亚株(A549/DDP)介绍：人非小细胞肺癌细胞耐药亚株(A549/DDP)是用药物剂量增选法筛选获得的A549 细胞耐药亚株。。
人非小细胞肺癌细胞耐药亚株(A549/DDP)特性：
1） 来源：肺癌
2） 形态：上皮细胞样
3） 含量：>1x106 个/mL
4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5） 规格：T25 瓶或者1mL 冻存管包装
运输和保存：使用含有优质胎牛血清的2ml 冻存管发送存活细胞。收到细胞后，可在1000RPM，常温条件下，离心5min 后，于洁净操作台弃去上清，加入推荐使用的培养基后转移至10cm 培养皿或者T25 培养瓶中培养，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
人非小细胞肺癌细胞耐药亚株(A549/DDP)用途：仅供科研使用。
人非小细胞肺癌细胞耐药亚株(A549/DDP)培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
注意：客户收到细胞后按照下面的要求操作：培养瓶里面的培养液是不含药物的。待细胞长到70-80%的汇合度时，去掉培养液，加入含500ng/ml DDP 药物的培养液，放入培养箱，这段时间肯定会有小部分细胞悬浮起来，但是不要紧，通过换液可以去掉，下面的细胞待长满就可以消化传瓶了，这时可以一直用含药培养液来消化培养细胞，一两代之后可以将药物浓度提高到800ng/ml，含药培养液用于细胞培养都没问题的，冻存的时候就不要在冻存液里面加药物了。
1）准备1640 培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091)，90%；北美胎牛血清，10%，添加800ng/ml DDP。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37 摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL 细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL 培养基混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm 皿中，加入约8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS 润洗细胞1-2 次。
2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml 含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO 后进行冻存。
注意事项：
1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
