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微生物学

支原体的分离培养鉴定

2024-05-13 微生物学 加入收藏
原理标本分别接种于支原体鉴别培养液内。溶脲脲原体可产生脲酶,使分糖产氨,培养液呈碱性,指示剂由黄色变为粉红色。人型支原体能分解精氨酸产氮,使含有精氨酸肉汤培养液

原理

标本分别接种于支原体鉴别培养液内。溶脲脲原体可产生脲酶,使分糖产氨,培养液呈碱性,指示剂由黄色变为粉红色。人型支原体能分解精氨酸产氮,使含有精氨酸肉汤培养液呈碱性而呈粉红色。

材料与仪器

细菌样本
支原体分离鉴定培养液
恒温培养箱 培养管 离心机

步骤

【标本采集】标本采集后应立即送检,室温保存不超过2小时,2—8℃保存不超过5小时。


男性:用男性无菌拭子插入尿道口内2—4cm处轻轻旋转取分泌物;也可取前列腺液或精液培养。必要时也可用尿液作支原体培养,取清晨第1次尿的中段尿10—20ml,经2000rpm离心10分钟,取沉渣接种,但尿液支原体培养阳性率明显低于尿道分泌物。


女性:用扩阴器扩阴后,用女性拭子在宫颈口内1—2cm处轻轻旋转取宫颈分泌物;也可用羊水培养。不推荐用尿液。


【培养】


1、培养管复温取出所需要数量的培养管,复温至室温,作好标记。


2、接种将拭子插入培养管,旋转并挤压数次,使拭子中支原体渗入液体中,拭子经灭菌处理后妥善处理;尿液沉渣、精液、羊水、前列腺液等液体标本取0.2ml接种培养液,充分混匀。


3、培养35—37℃恒温培养24—48h小时,观察结果。

注意事项

1、Uu 、Mh生长应保持培养液透明清亮,无明显浑浊,偶遇浑浊者不得报支原体阳性。


2、Uu生长,培养液正常变色时间在24小时内,但如果标本含量少时,变色时间可能超过24小时。Mh生长,培养液正常变色时间在24—48小时之内,如果标本含量较大时,变色时间可能会小于24小时。


3、不能确定有无杂菌污染时,可将培养液取出少许接种于血平板或通过0.45um滤膜过滤培养,根据血平板菌落生长或过滤后培养的颜色变化来判断杂菌污染。

常见问题

结果判定: Uu应在24小时内报告,Mh应在48小时内报告,其他结果在48小时内报告,最长不超过72小时。培养管液体由橙色变红色,透明清亮,无明显浑浊,表明有Uu和(或)Mh生长,可判为阳性;培养管液体无任何变化,可报阴性结果;培养液明显浑浊变红者,应判无支原体生长。必要时可做支原体固体培养,低倍镜下观察有荷包蛋样菌落生长者为支原体阳性。


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