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微生物学

腹泻病毒的直接检测

2024-04-18 微生物学 加入收藏
简介有几种不同的检测方法可以被用来直接检测临床标本中的腹泻病毒,包括电子显微镜法、抗原检测法和核酸检测法。根据检测条件、当地人员的专业背景和实验室设施不同,这些

简介

有几种不同的检测方法可以被用来直接检测临床标本中的腹泻病毒,包括电子显微镜法、抗原检测法和核酸检测法。根据检测条件、当地人员的专业背景和实验室设施不同,这些不同检测方法在不同诊断实验室中使用范围不同。

材料与仪器

器材:
①一次性无菌手套
②标本采集管
③电子显微镜、PCR仪
④培


试剂:
①材料:待采标本
②PBS缓冲液
③培养基

步骤

腹泻病毒的直接检测基本方法有如下几种:


1.电子显微镜法 电镜的敏感度可以通过使用高价免疫血清聚集病毒来提高(即免疫电镜),但是即使采用了这种改良的方法,检测的敏感度也仅限于大约每毫升10~106个病毒颗粒。据报道,电镜检查仅在不超过50% 的急性诺如病毒感染患者中呈阳性,对于轮状病毒的检测敏感性不如酶免疫实验(EIA)。


2.抗原检测 对每种腹泻病毒都有已经上市的抗原检测试剂。使用的检测方法有多种,包括固相EIA,免疫色谱法和乳胶凝聚试验。固相EIA可以在临床实验室进行,通常在2个小时内出结果。免疫色谱法和乳胶凝聚试验简单易行,不到30分钟就可以出结果,但是在有些报告中,乳胶凝聚试验的敏感性(70% ~90% )低于其他检测方法(>90% )。


3.核酸的检测 最常用的是PCR法,但是对于RNA病毒,核酸序列依赖性扩增技术(NASBA)也有使用。在核酸扩增中,粪便标本中经常存在抑制PCR反应体系中酶的活性的物质,妨碍病毒核酸的检测。将粪便稀释成10% 的悬液后,将标本加热至95 ℃,从病毒衣壳中释放出核酸;使用这种方法时,加热后必须立即对样本进行检测,以避免时间过长导致核酸降解。


另一种方法是使用变性剂,例如硫氰酸胍,该方法需要额外的操作步骤,但是核酸提取物不易在分析前快速降解。现在有许多商品化试剂盒可以从粪便标本中有效地提取病毒核酸。还可以向提取的标本中加入一种内控品对照核酸,这是一种能识别是否存在抑制物的常用方法。


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