小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)
小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)介绍:小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)来源于BABL/cN 小鼠，有抗体依赖的吞噬作用，生长受硫酸葡聚糖、PPD和LPS 的抑制；可产生IL-1β和大量的溶菌酶。
小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)特性:
1） 来源：BABL/cN 小鼠淋巴
2） 形态：单核细胞/巨噬细胞样
3） 含量：>1x106 个/mL
4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5） 规格：T25 瓶或者1mL 冻存管包装
运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)用途：仅供科研使用。
小鼠单核巨噬细胞(J774A.1)培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备DMEM 培养基(DMEM，GIBCO，货号11965-092)；北美胎牛血清(UnitedStates，GIBCO，货号16000-044)，10%；双抗1%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37 摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL 细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4mL 培养基混合均匀。在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm 皿中，加入约8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS 润洗细胞1-2 次。
2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM 条件下离心4 分钟，弃去上清液，补加1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。
下面T25 瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗瓶底1-2 次后加入1ml 胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml 完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM 离心5 分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO 至最终浓度为10%。加入DMSO 后迅速混匀，按每1ml 的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物（mingzhoubio）按每个冻存管细胞数目大于1X106 个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，至少2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项：
1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
