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微生物学

虫媒病毒的标本采集和处理方法

2024-04-18 微生物学 加入收藏
简介虫媒病毒的标本采集:病毒检测成功与否很大程度上取决于采集标本的类型、时间、质量。保存、运输与标本处理等环节。根据患者感染虫媒传染病的类型,采集对应的标本。在

简介

虫媒病毒的标本采集:病毒检测成功与否很大程度上取决于采集标本的类型、时间、质量。保存、运输与标本处理等环节。根据患者感染虫媒传染病的类型,采集对应的标本。在采集标本过程中要遵守生物安全法规,并做好个人防护。

原理

病毒检测成功与否很大程度上取决于采集标本的类型、时间、质量、保存、运输与标本处理等环节。

大多数虫媒病毒感染是不显性的和轻型的,1~2 周可自愈,但有些病毒可引起严重的症状。一般来讲,虫媒病毒感染后的临床症状分为三类:发热、皮疹、关节炎;发热、脑炎;发热、出血。一般一种病毒只引起一类症状,如引起脑炎的病毒一般不再引起出血的症状,同样,引起出血的病毒也一般不再引起脑炎。但是,有些病毒可同时引起多种症状,如甲病毒属的基孔肯雅病毒和黄病毒属的登革病毒,不但可引起发热,皮疹、关节炎,还可以引起出血等严重症状。从虫媒病毒引起的三类症状可以看出,发热是虫媒病毒感染的最常见症状,也是病毒感染首先出现的症状,无论病毒是否引起脑炎或出血热均首先表现为发热。

材料与仪器

根据病例感染虫媒传染病的类型,采集对应的标本,包括人体样本(血液、脑脊液、脑组织、各种脏器)媒介动物(哺乳动物及鸟类)和媒介蚊虫的样本。

步骤

1. 血液标本惇离心分离血清,可直接用于病毒分离、核酸检测和血清学检测。

2. 脑脊液脑脊液可以直接接种进行细胞培养。

3. 组织标本﹑取相应组织约 1 g,于冷冻的研磨器中研磨,加入 2ml 稀释液,将组织研磨成匀浆,4 ℃ 5 000 r/min 离心 15 分钟,吸取上清液,即可进行病毒特异抗原或核酸检测;也可将上清液用一次性小滤器过滤除菌或加人 10 万单位 /ml 青霉素和链霉素 0.2ml(终浓度 1 万单位 1 ml),4 ℃放置 3 小时灭菌,悬液用于接种乳鼠或细胞,余下的组织 -80 ℃保存。

4. 媒介标本﹑媒介标本用无菌生理盐水或 Hank's 液洗 2 次后,加入 1~2 ml 稀释液研磨成匀浆,3 000 r/min 离心 20 分钟,吸取上清液,可用于病毒特异抗原或核酸检测,也可向上清液中加人 10 万单位/ml 青霉素和链霉素灭菌处理,然后研磨制成悬液,低速离心后取上清用于病毒分离。因媒介死后体内的病毒浓度迅速下降,应争取尽快接种。


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