Login
欢迎浏览恩派尔生物资料网
我要投稿 请登录 免费注册 安全退出

您现在的位置是: 首页 > 实验方法 > 微生物学

微生物学

空斑减少法中和试验

2024-04-19 微生物学 加入收藏
简介中和试验(neutralization test)是在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物,使病毒与抗体相互反应,再将混合物接种到敏感的宿主体内,然后

简介

中和试验(neutralization test)是在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物,使病毒与抗体相互反应,再将混合物接种到敏感的宿主体内,然后测定残存病毒感染力的一种方法。凡是能与病毒结合,并使其失去感染力的抗体称为中和抗体,因为病毒要依赖于活的宿主系统复制增殖,因此,中和试验必须在敏感的动物体内(包括鸡胚)和培养细胞中进行。
空斑减少法是在细胞培养上进行病毒中和试验,近年来多采用空斑减少法。先将病毒稀释成适当浓度,使每 0.2 ml 含 80~100 个 PFU(空斑形成单位),与不同稀释度的待检血清等量混合,置 37℃ 作用 1~2 小时,分别测定 PFU,使空斑减少 50% 血清稀释度即为该血清的中和效价。

原理

中和试验的基本原理是特异性的抗病毒抗体(中和抗体)与病毒结合之后,使病毒失去吸附、穿入宿主细胞的能力,从而阻止了病毒在宿主细胞内的复制和病毒感染机体的过程。进行中和试验时,首先将病毒与抗体在适当的条件下混合、孵育后,接种给敏感宿主,然后观察病毒感染敏感宿主的情况,即观察残存的病毒对宿主的感染力。用敏感动物进行中和试验时,主要观察抗体能否保护易感动物免于死亡、瘫痪;用细胞培养法进行中和试验时,主要观察抗体能抑制病毒的细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)或病毒空斑形成(virusplaque formation)等;用鸡胚接种法进行中和试验时,主要通过观察绒毛尿囊膜上的痘疮结构来检测病毒,或用血凝试验检测鸡胚尿囊液流感病毒的滴度。

材料与仪器

器材:


①一次性无菌手套


②培养箱


③注射器


④细菌滤器


试剂:


①宿主:敏感细胞、敏感动物、鸡胚;


②已知标准的抗病毒血清(20 个抗体单位/0.1 mL)和已知阴性血清(56℃30 分钟灭活);


③病毒分离物

步骤

空斑减少法中和试验的基本过程可分为如下几步:


①将病毒稀释成适当浓度,使每 0.2 mL 含 80~100 个 PFU(空斑形成单位)


②不同稀释度的待检血清等量混合,置 37 ℃ 作用 1~2 小时


③分别测定 PFU,使空斑减少 50% 血清稀释度即为该血清的中和效价。

注意事项

(1)病毒悬液:低温保存,多次分装,避免反复冻存。


(2)抗血清:常需要在 56 ℃ 灭活 30 分钟,避免一些非特异性物质增强抗体中和作用,和灭活病毒。


(3)孵育温度和时间:37 ℃1 小时。


文章底部广告位

文章评论

加载中~