编码β-半乳糖苷酶

1. 杆状病毒是一类在自然界中专一性感染节肢动物的DNA病毒，病毒粒子呈杆状，基因组为双链环状DNA分子，DNA以超螺旋形式压缩包装在杆状衣壳内，大小在90——180 Kb之间。目前杆状病毒作为高效、安全的无公害生物虫剂广泛应用于害虫防治。

2. 大肠杆菌E .coli-昆虫细胞的穿梭载体筛选系统[10 ]E .coli-昆虫细胞穿梭载体 （bacmid）是迄今为止最为方便、快捷的重组杆状病毒筛选系统。Bacmid既能象质粒一样在E .coli中复制 ,亦能象病毒一样感染昆虫细胞。Bacmid为一包含有mini -F复制子、卡那霉素抗性筛选标记和细菌转座子Tn 7的靶序列attTn7e及LacZ片段的重组病毒。转移载体的作用在此被贡献质粒所取代。贡献质粒设计为含抗庆大霉素基因和多角体蛋白启动子控制的外源基因两侧分别为tn7的左臂和右臂。同时为了产生位点特异的转座 ,还需有一个辅助质粒 （该质粒为四环素抗性筛选标志 ）提供转座蛋白。因此 ,当将bacmid、贡献质粒、辅助质粒转化同一个菌株时 ,由辅助质粒产生的转座蛋白 ,将抗庆大霉素基因和多角体蛋白启动子控制的外源基因转座到bacmid的attTn7序列上 ,同时破坏了Lac -Z的阅读框架 ,这样只要将转化上述质粒的菌株在含卡那霉素、四环素、庆大霉素及X -gal和IPTG的LB培养基上筛选白斑即可得到复合Bacmid ,将复合Bac midDNA纯化后转染昆虫细胞 ,就得到了纯的重组病毒 ,在昆虫细胞中外源基因在多角体启动子的控制下进行表达。该系统是目前BEVS中最为方便、快捷的系统 ,整个重组病毒筛选的周期可缩短为 7- 10d ,且可以连续筛选 ,因此十分适合于cDNA文库的构建及蛋白质工程研究方面的应用。同时 ,贡献质粒亦较常规的重组转移载体为小 ,可以构筑较多的限制性酶切位点和进行改建 ,以利于外源基因的插入 ,且贡献载体不仅能适用于BEVS中 ,亦能适合在其它真核生物表达系统中进行转座 ,艺表达外源基因。由于转座的免疫性 ,可以防止外源基因的多次插入。不足之处在于只有 12 .5kb的外源基因插入多角体蛋白基因位点 ,而且 ,插入后可能破坏了多角体启动子工作环境 ,以致外源基因的表达量较之传统的同源重组纯化的重组病毒略有降低。