Login
欢迎浏览恩派尔生物资料网
我要投稿 请登录 免费注册 安全退出

您现在的位置是: 首页 > 实验方法 > 微生物学

微生物学

在细胞培养板内做病毒空斑形成单位试验

2024-05-09 微生物学 加入收藏
一、简介在制备新的病毒毒种贮液,或为蛋白质的生产和分析而进行感染时,了解毒种的滴度是非常重要的。 二、操作方法在细胞培养板内做病毒空斑形成单位试验 三、原理&l

一、简介

在制备新的病毒毒种贮液,或为蛋白质的生产和分析而进行感染时,了解毒种的滴度是非常重要的。

 二、操作方法

在细胞培养板内做病毒空斑形成单位试验


 三、原理

<link />

材料与仪器

病毒
95% 酒精 胰酶 含 5%小牛血清的 Eagle
细胞培养板

步骤


(1) 用细胞培养板 (6孔),若用旧板,洗净后浸于 95% 酒精中5 min, 再用紫外线照射 2-4 h备用,新板可直接使用。


(2) 将传代细胞系经胰酶消化分散后,用含 5%小牛血清的 Eagle 将细胞配成 3 X 105/ml(依细胞种类而定)。


(3) 按每孔 3ml 加入细胞悬液,在 37℃ 5% CO2 培养箱中培养 24 h 或 48 h, 直至形成单层。


(4) 除去生长液,每孔加入 0.1 ml 不同稀释度病毒,然后将此板于 37℃5% CO2 培养箱中吸附1 h 。


(5) 将双倍营养覆盖液与等量融化的 2% 琼脂水溶液混匀,并维持于 45-50℃防凝。双倍营养覆盖溶液配制: 4 ml 灭活胎牛血清, 20 ml 10倍浓缩 Eagle, 13. 3 ml 1%酵母浸液-5% 水解蛋白水溶液, 6 ml 7. 5% NaHC03( 水配), 2 ml 双抗(水配), 54. 7 ml 无菌三蒸水,加入等量 56℃已融化的 2%琼脂水溶液并摇匀。


(6) 融化的营养琼脂覆盖层液在 45-50℃下每孔加 3ml, 待冷凝后倒置于 37℃5% CO培养箱内培养。 1~5 d 后再加第二层染色覆盖层(依病毒种类而定),其中含有 1 : 25 000 的中性红,继续培养于暗处,定期检查空斑情况。

<link />

注意事项

<link />

常见问题

<link />



文章底部广告位

文章评论

加载中~