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RT中Olig(dT)15引物与随机引物?
RT实验Olig(dT)15引物合成的条带明显优于随机引物,不是随机引物的效果较好吗?怎样解释这种现象网友一回答:Olig(dT)适合于长链甚至全长mRNA的R
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PCR of Trouble shooting guide
1. 阴性,不出现扩增条带PCR反应的关键环节有:(1)模板核酸的制备。(2)引物的质量与特异性。(3)酶的质量。(4)PCR循环条件。模板:(1)模板中含有杂
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试验用gelred代替EB,试验不理想,求助!!
问:实验室最近用gelred代替EB,我是直接把gelred稀释到6X Loading Buffer 中,2ml上样缓冲液加分别加入1微升,2微升--10微升的
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双酶切连接反应的经验谈
1、 在双酶切载体时如果2个酶切位点靠得很近,必须注意酶切顺序。因为有的限制性内切酶要求其识别序列的两端至少保留有若干个碱基才能保证酶的有效切割。有的酶要求识别
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免疫PCR要点与注意事项
一、免疫PCR要点(1)连接分子免疫PCR需要适当的连接分子连接报告分子和抗原抗体复合物。1 992年Sano用重组的链亲和素-蛋白A嵌合体作为连接分子,创立了
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PCR专栏
PCR目录 PCR原理 PCR反应体系与反应条件 PCR步骤 PCR检测
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PCR技术详解
PCR技术概论 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产
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Real time PCR 实验注意事项
实验中的一些好习惯 加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均 移液枪用完之后要归到最大计量的位置,防止久而久之弹簧失去弹性 一定要记着关水浴箱,切记
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Taqman-LNA探针的合成
什么是LNALNA 是新型的核酸类似物,它包含了2'-氧4' 碳亚甲基连接,这个连接限制了呋喃核糖环的灵活性,因而将其结构锁定成一个刚性的双环模式,因此而提高杂
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详细介绍引物设计原则
引物设计原则一:1. 引物的长度一般为15-30 bp,常用的是18-27 bp,但不应大于38,因为过长会导致其延伸温度大于74℃,不适于Taq DNA聚合酶
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PCR之引物详解
1. 引物是如何合成的? 目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。 DNA 合成仪有很多种 , 主要都是由 ABI/PE 公司生产,无论采用什么机器合成,合成
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多年PCR经验总结
一、增加PCR的特异性1. primers design这是最重要的一步。理想的,只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的 一些条件(1)足
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PCR引物合成技巧
引物合成介绍1.引物是如何合成的?目前引物合成基本采用固相亚磷酰胺三酯法。DNA合成仪有很多种, 主要都是由ABI/PE 公司生产,无论采用什么机器合成,合成的
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PCR引物设计之个人心得篇
记得当初写本科论文,感到不知道讨论什么问题好。愣是写了一大段的PCR条件摸索的讨论。后来PCR成为实验最基本的一步了,但是发现在PCR中还是有许多需要注意的地方
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引物溶解稀释的方法
干粉引物溶解稀释方法: 收到引物后,在开启离心管盖前在3000-4000转/分钟的转速下离心1分钟,以防开盖时引物干粉散失。引物保存在高浓度的状况下比较稳定。如