尿囊腔接种

尿囊腔接种法广泛应用于流感病毒、流行性腮腺炎病毒和新城疫病毒的适应和传代培养，病毒在尿囊腔内皮细胞中复制后，被释放到尿囊液中，因此在尿囊液中含有大量的病毒。

鸡胚接种技术的原理是用病毒（如牛痘病毒（vaccinia virus）和鸡新城疫病毒（Newcastle-disease virus））接种鸡胚。 牛痘病毒适宜于在绒毛尿囊膜上生长，经培养后，产生肉眼可见的白色痘疱样病变，似小结节或白色小片云翳状。 鸡新城疫病毒适宜接种在尿囊腔和羊膜腔内，生长后，鸡胚全身皮肤出现出血点，以脑后最显著。 鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的 动物病毒 的一种培养方法，此方法可用以进行多种病毒的分离、培养，毒力的滴定，中和试验以及抗原和疫苗的制备等。

器材：

①孵卵箱

②检卵灯、照明灯、卵杯、卵盘、鸡胚开孔器

③注射器

④眼科用剪刀和摄子、酒精灯和毛细吸管

试剂：

①材料：受精鸡卵最好选择健康来亨鸡受精卵，因为来亨鸡的卵壳洁白易于照视观察，如无此卵也可选择其他受精鸡卵。用于病毒培养的受精鸡胚，最好是来自无特定病原体鸡群 。

②消毒剂（2.5％ 碘酒和 75% 酒精）

③2％ 来苏儿液

尿囊腔接种的基本过程可分为如下几步：
(1) 接种步骤与方法

1) 取 9~11 日龄的鸡胚，在检卵灯上照视后，用铅笔画出气室与胚胎位置，并在胚胎面与气室交界之边缘上约 1 mm 处避开血管作一标记，此即为注射点。

2) 将鸡胚竖放在卵杯上，钝端向上。用 2.5％ 碘酒及 75％ 酒精分别消毒气室部的蛋壳，并用开孔器钻开一长约 2 mm 小口，此操作勿损伤壳膜。

3) 再次用 2.5％ 碟酒消毒钻孔区，以擦去蛋壳碎粒，并用 1 mL 注射器吸取待接种的病毒液 0.1~0.2 ml，将针头刺入孔内，经尿囊膜入尿囊腔，注入病毒液。

4) 用 2.5％ 碘酒消毒后，再用石蜡熔化封孔，于 33~35 屯孵卵器孵育 48~72 小时（培育时间应根据病毒种类及收获的材料何时使用而定），每日照检，于接种后 24 小时内死亡者为非特异性死胚，应弃去。

(2) 解剖与收获：接种后收获病毒的时间根据不同病毒而异，甲型流感病毒一般培养 44~48 小时，乙型流感病毒培养 72 小时。

1) 收获前鸡胚须置 4℃ 冰箱 6 小时或过夜，但不能放置时间过长。

2) 用 2.5％ 碘酒和 75％ 酒精消毒气室处的卵壳，并用灭菌剪刀剪去气室部的卵壳，此时勿使其碎片落于未损伤的壳膜上。用无菌摄子撕去气室部壳膜，并翻开到卵壳边上。

3) 将鸡卵倾向胚胎一侧，用灭菌毛细吸管通过绒毛尿囊膜进入尿囊腔，吸出尿囊液。一般一个鸡胚可收获 5~10 mL 的尿囊液。若操作时损伤了血管，则病毒会吸附在红细胞上，尿囊液则无用。收获的尿囊液经无菌试验后，可在 4℃ 或低温保存待用。

1. 防止污染 为了减少污染，整个过程均需无菌操作，否则鸡胚一经污染，即迅速死亡或影响病毒的培养 。

2. 适宜的培养温度 接种过的鸡胚，应根据实验病原繁殖所需温度，放入 33~37 °C 温箱内培养 。