粘粒和质粒克隆的纯化实验基本方案

1.  通过原位杂交检测硝酸纤维索滤膜上影印菌落。

2.  用无菌的牙签挑出阳性克隆，接种到含适当抗生素的1 ml 冷的LB培养基中，保存在4℃抑制细菌生长。

3.  取1~25 μl 菌悬液涂布在含有相同抗生素的平板上，37℃培养过夜，在直径100 平板上长出25~250个菌落为宜。

4.  将菌落影印在硝酸纤维素滤膜上，变性、复性、烤膜和杂交化。

 

5.  对照次级平板的放射自显影结果，挑选独立的阳性克隆，培养扩增后分离质粒或粘粒的DNA。