噬菌体文库的扩增实验基本方案
材料与仪器噬菌体MgSO4 麦芽糖 琼脂糖 氯仿 DMSO SM离心机 分光光度计 水浴锅步骤1. 制备铺平板菌（1）2.5 ml 新鲜过夜培养的宿主菌液接种
材料与仪器
噬菌体
MgSO4 麦芽糖 琼脂糖 氯仿 DMSO SM
离心机 分光光度计 水浴锅
MgSO4 麦芽糖 琼脂糖 氯仿 DMSO SM
离心机 分光光度计 水浴锅
步骤
1. 制备铺平板菌
（1）2.5 ml 新鲜过夜培养的宿主菌液接种于250 ml 含0.2%麦芽糖和10 mmol/l MgSO4的LB培养液中。
（2）在37℃恒温摇床剧烈摇荡2~4 h，培养液中菌悬液浓度OD600达到0.5左右。
2. 将装有文库的微量离心管在离心机上稍加离心，以便与氯仿分开。
3. 将已包装和滴定的噬菌体水相（不含氯仿）加于铺平板菌中，37℃温育15 min。
（1）2.5 ml 新鲜过夜培养的宿主菌液接种于250 ml 含0.2%麦芽糖和10 mmol/l MgSO4的LB培养液中。
（2）在37℃恒温摇床剧烈摇荡2~4 h，培养液中菌悬液浓度OD600达到0.5左右。
2. 将装有文库的微量离心管在离心机上稍加离心，以便与氯仿分开。
3. 将已包装和滴定的噬菌体水相（不含氯仿）加于铺平板菌中，37℃温育15 min。
4. 加0.5 ml 噬菌体/宿主菌混合液到8 ml 47℃保温的顶层琼脂糖中，混匀后迅速倒在新鲜的37℃保温的150 mm 的H平极上。
5. 轻轻转动平板待顶层琼脂糖铺匀后再放置5 min 使其凝固，倒扣平板于37℃培养6~7 h 。
5. 轻轻转动平板待顶层琼脂糖铺匀后再放置5 min 使其凝固，倒扣平板于37℃培养6~7 h 。
6. 从恒温培养箱中取出所有转染的平板，分别在每一个平板中加入10 ml SM悬浮培养基，于4℃放置2~16 h。
7. 洗脱噬菌体，然后从所有平板中收集SM并合并到一个玻璃瓶或聚丙烯塑料管中。
8. 以2 800 g 离心5 min，将上清转移到新的带Teflon盖的玻璃试管中，再加入0.5 ml 氯仿，混匀，滴定已扩增的文库。
7. 洗脱噬菌体，然后从所有平板中收集SM并合并到一个玻璃瓶或聚丙烯塑料管中。
8. 以2 800 g 离心5 min，将上清转移到新的带Teflon盖的玻璃试管中，再加入0.5 ml 氯仿，混匀，滴定已扩增的文库。
常见问题
用于扩增λ载体文库的对应大肠杆菌宿主菌株
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