各家cDNA文库构建试剂盒优缺点比较

Invitrogen的: 采用的是Gateway技术：利用λ噬菌体位点特异重组系统的BP和LR双向反应，首先将PCR产物用传统方法克隆到Gateway化的入门载体，这个目标基因就可以迅速方便而且定向地重组到任何Gateway化的表达载体上. 优点: 1无需限制酶切、无需连接，只要利用重组酶就可以穿梭于任何 Gateway化的表达载体间，典型的克隆效率高达95％以上，保证正确的方向和阅读框。 2特别适合研究一个基因在不同表达系统中的表达,对于后续的工作有利。 缺点: 1无论是Gateway还是Topo，封闭的系统仅适用于Invitrogen提供的表达载体，使得适用成本高。而且在启动子和目的基因间必需插入一段特定的噬菌体重组酶识别序列，对表达的影响不好估计。 2所得的并非都是全长cDNA 有不对之处忘大家指正 Clontech的: 采用的是SMART与Infusion技术：合成引物时两端对应加入任意一种线性化载体两端15个碱基，PCR扩增目标基因后就可以利用重组酶直接将目标基因定向重组到任意指定表达载体上的指定位点。 优点： 1采用SMART技术,可以方便的得到全长cDNA. 2开放的技术平台，任何质粒、任何目的基因都能适用。 3使得PCR产物克隆彻底摆脱了中间载体、重复亚克隆重复筛选的烦恼，一步到位，不受载体和酶切位点的限制，不用连接、补平、磷酸化，也不受PCR产物末端影响，而且速度快（30min），重组效率高达90%。 4在载体启动子和目的基因之间不会增加额外的碱基，真正精确定向克隆。 5Infusion 试剂 以冻干形式提供，可以在室温下保存和运输，不必担心运输过程中的温度问题。 缺点： 不适用于一对多的克隆，目的基因无法在不同载体间穿梭。针对每个载体均要合成特定的引物进行PCR。 strategen的: 优点 1 放射性 同位素 可跟踪实验进程; 2 有包装蛋白 缺点 1 放射性的东西可否不用 2 要加接头,还要磷酸化 clontech 的: 第二链的合成有PCR技术,是否会引起碱基突变 Novagen的： 优点 1 提供两种primer，oligo dT & random primer，可根据目的进行选择； 2 提供EcoRⅠ/HindⅢ酶切位点，便于定向克隆； 缺点 不知什么原因第二链合成效率不高