感受态细菌的使用

一、对于感受态细菌效率的测定或连接产物的转化(其它如基因突变产物的转化等参考连接产物进行)：

1. 在冰上缓慢融解感受态细菌(对于新鲜制备的感受态就可以直接使用了)，如果检测感受态细菌的效率，加入100pg-10ng质粒，但质粒的体积不宜超过感受态细菌量的10%。如果转化连接产物，每100微升感受态细菌加入10微升连接产物。

2. 轻轻用手指弹动离心管，以混匀细菌和质粒或连接产物。冰浴或冰水浴放置30分钟。

3. 42℃水浴，热休克2分钟。

4. 热休克后立即置于冰水浴中，2分钟。

5. 加入900微升LB，37℃200rpm培养1小时。

6. 如果检测感受态效率，取100微升涂布到含有相应抗生素的LB平板上。如果转化的是连接产物，2000-3000g离心1分钟或更长时间使细菌充分沉淀下来。去除约900-950微升LB培养液。细菌沉淀用余下的LB培养液重悬，然后全部涂布到含有适当抗生素的LB平板上。37℃培养过夜。

二、对于质粒的转化：

1. 融解感受态细菌，加入不少于50ng质粒到50或100微升感受态细菌中。质粒的量可以是1微克或更多，但体积不宜超过感受态细菌量的10%。

2. 轻轻用手指弹动离心管，以混匀细菌和质粒。冰浴或冰水浴放置10分钟。

3. 取全部菌液直接涂布到含有适当抗生素的LB平板上，37℃培养过夜。