热酚法抽提酵母总RNA的方法

1. 将酵母细胞培养在3ml选择性培养基中，30℃过夜旋转培养。

2. 稀释过夜培养的菌液，重新在10ml培养基中培养细胞。

3. OD600达到1.0时，收菌，4000rpm/min离心5min,弃培养基。

4. 将细胞悬浮于400μlAE缓冲液（50mMSodiumAcetate,10mMEDTA调整pH值至5.2）。

5. 加入1/10体积的10%SDS，充分混合。

6. 加入等体积在65℃预热的酸性酚（pH4.5），混合。

7. 65℃加热5min，冰上放置10min。

8. 在室温下8000rpm/min离心10min。

9. 取水相,加入等体积的酚/氯仿/异戊醇（25∶24∶1），10000rpm/min离心8min。

10. 取水相，加入等体积氯仿/异戊醇（49∶1）10000rpm/min离心8min。

11. 加入1/10体积3MpH5.2的醋酸钠，2.5倍体积的纯乙醇，-20℃过夜沉淀。

12. 沉淀样品于4℃离心5min，去除液体。

13. 在冰上干燥RNA（放置15min），最后用适量DEPC水溶解RNA。