二、斜面接种法
该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。
（1）左手平托两支试管，拇指按住试管的底部。外侧一支试管是斜面上长有菌苔的菌种试管，内侧一支是待接的空白斜面，两支试管的斜面同时向上。用右手将试管塞旋松，以便在接种时容易拔出。
（2）右手拿接种环（如握毛笔一样），在火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管的其余部位也过火灭菌．
（3）将两支试管的上端并齐，靠近火焰，用右手小指和掌心将两支试管的试管塞一并夹住拔出，试管塞仍夹在手中，然后让试管口缓缓过火焰。注意不得将试管塞随意丢于桌上受到沾污，试管口切勿烧得过烫以免炸裂。
（4）将已灼烧的接种环伸入外侧的菌种试管内。先把接种环的先端触及无菌苔的培养基上使其冷却（如果操作迅速，此时接种环尚未完全冷却）。再根据需要用接种环沾取一定量的菌苔，注意勿刮破培养基。将沾有菌苔的接种环迅速抽出试管，注意勿使接种环碰到管壁或管口上。
（5）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管的底部，轻轻向上划线（直线或曲线，根据需要确定），勿划破培养基表面。
（6）接好种的斜面试管口再次过火焰，试管塞底部过火焰后立即塞入试管内。
（7）将沾有菌苔的接种环在火焰上烧红灭菌。先在内焰中烧灼，使其干燥后，再在外焰中烧红，以免菌苔骤热，会使菌体爆溅，造成污染。
（8）放下环后，再将试管塞旋紧，在试管外面上方距试管口2～3cm处贴上标签。
斜面接种方法及无菌操作过程如下具体操作过程见
图3。
三、穿刺接种法
用接种针经火焰灭菌，沾取少量菌种，垂直地穿入试管固体培养基中心至底部，然后将挑起菌落的接种针平行于管壁插入琼脂斜面底部、沿着原接种线将针拔出、烧试管塞和试管口、塞上试管塞，再将接种针上残留的菌体在火焰上烧掉。要做到手稳、动作轻巧快速。见下图4。（a:垂直接种法，b：水平接种法）
图4
