RANi术语表
RNA干扰是最近发现的一种功能工具。当RNA导入一个细胞时,最终会引起细胞内互补mRNA的降解,从而导致基因功能活性的阻断。
PTGS转录后基因沉默(posttranscriptionalgenesilencing);一种首先在植物中确定,然后发现在动物中也存在的现象。尽管PTGS最初被描述作一种病毒防御和转位子沉默的内源方法,现在它已经成为一种新的令人激动的研究工具RNAi干扰。
协同抑制(Cosuppression)基因沉默的一种特殊情况,来源于转基因的RNA与同源内源基因同时被抑制。
静息作用(Quelling)用于在粉色面包霉菌(Neurosporacrassa)中描述协同共抑制。这个术语仅仅用来在真菌中描述沉默。
dsRNA双链RNA(Double-strandedRNA);通常指长的或者全长的RNA双链。这些大的dsRNA在大多数哺乳动物细胞类型中全面启动宿主细胞的关闭(shutdown);随后细胞开始降低非靶标基因的表达,最终经历凋亡(apoptosis)。
siRNA短的(或者小的)干扰RNA(Short(orsmall)interferingRNA);哺乳动物细胞参与引起RNAi反应的21-23核苷酸的短的RNA双链。
RISCRNA诱导沉默复合体(RNA-inducedsilencingcomplex);即所推测的多蛋白复合物,将siRNA和细胞内mRNA结合到一起,激活裂解机制(可能是内切核苷酸的),释放mRNA并进行降解。
shRNA短的发夹RNA(ShorthairpinRNA);也称短的干扰发夹(shortinterferinghairpin);在体内通过RNAi降低互补序列基因的表达。
PolIII启动子PolIII启动子U6或者HI(PolIIIpromoter,U6orHI),通常用来驱动shRNA的产生。PolIII启动子具有在某一确定起始位点上游启动转录所需要的全部元件。
PolIII终止子PolIII终止子(PolIIIterminator);4个或者更多个T,提供PolIII依赖的转录终止。
U6启动子U6启动子(U6promoter)一种polIII型启动子,允许产生确定末端的小RNA(参看polIII启动子)。
入门载体(entryvector)包含attL位点,用来克隆DNA片段的Gateway®载体。U6入门载体,pENTR®/U6,专门设计使用U6polIII型启动子和终止子序列,RNAi靶序列克隆进入后将在哺乳动物细胞中形成shRNA。
目的载体(destinationvector)Gateway®适合的目的载体(DEST)包含attR位点,可以与入门克隆进行重组,构建表达载体。BLOCK-iT™RNAi慢病毒和腺病毒DEST载体接受来自U6入门载体的RNAi框。此外,也有在原核、酵母、昆虫或者哺乳动物系统表达天然蛋白或者融合蛋白的DEST载体可供选择。
LRClonase™便于attL和attR位点在LxRGateway®重组反应中进行重组的一种酶混合物,可以把DNA序列从入门载体转移到目的载体。