运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：

（1）干冰运输，收到后 立即转入液氮或者-80 度冰箱冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生 长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。 收到细胞后请拍照，3 天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。 

 

细胞接收后的处理：

1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细 胞有污染，请拍照后及时联系我们。 

2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4 或 5X 物镜)下进行，能 准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在 10X 和 20×物镜下，同时给刚收 到的细胞拍照，（10×，20×）各 2-3 张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细 胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落 或者脱落后抱团生长，可将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h，然后抽出瓶中 的培养基和未贴壁细胞 1000rpm 离心 5 分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照 说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。

5） 悬浮细胞：T25 瓶置于 37℃培养箱放置约 2-3h，然后抽出瓶中的培养基和 细胞 1000rpm 离心 5 分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说 明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。 

6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说 明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建 议 1：2 传代 。 

细胞用途：仅供科研使用。 

                        

本公司的细胞培养操作规程，供参考

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备 IMEM 培养基；优质胎牛血清，２０%；双抗，１％。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度 为 70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管迅速放入 37℃水浴中（水面要低 于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有 4mL培养基的 15ml 离心管中混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，加入 1mL培 养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有 5ml 培养基的培养瓶中培养过夜。 第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。 注：第一次传代推荐传代比例为 1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 1，细胞冻存时，取上清，可使用血球计数板计数。2，4min ，1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量 加入血清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度 1-2xE6/ml，每支 冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，至少 2 个小时以后转入液 氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 

 

注意事项：  1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染， 请立即与我们联系。 2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作， 并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。