运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到 后立即转入液氮或者-80 度冰箱冻存或直接复苏；（2）存活细胞，收到后应继 续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。 收到细胞后请拍照，3 天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

 

细胞用途：仅供科研使用。

 

细胞接收后的处理： 1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。 2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，酒精消毒瓶壁并将 T25 瓶置于 37℃培养 约 2-3h。 3）弃去 T25 瓶中的培养基，添加 6ml 新的完全培养基。 4）如果细胞长满 80%-90%请及时进行细胞传代，传代培养用本公司附带的完全 培养基。

细胞培养步骤 一．培养基及培养冻存条件准备： 1）准备内皮专用培养基 2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37 摄氏度，培养箱湿 度为 70%-80%。 3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

 

二．细胞处理： 1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入 4mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。 2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。 2.加 2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培养箱 中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分钟， 弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面以 T25 瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗瓶底 1-2 次后加入 1ml 胰酶， 细胞变圆脱落后，加入 2ml 完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM 离心 4 分钟去掉上清。用血清重悬浮，加 DMSO 至最终浓度为 10%。加入 DMSO 后迅速混匀，按每 1ml 的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好 标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于 1X106 个细胞冻存。 3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，至少 2 个小时以后转 入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。 注意事项： 1. 收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立 即与我们联系。 2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注 意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。